流式细胞技术原理和方法.pptVIP

流式细胞技术(Flow Cytometry); 流式细胞仪(Flow Cytometer, FCM)，又名荧光激活细胞分类器 (Fluorescence Activited Cell Sortor, FACS), 它是将流体喷射技术、激光技术、空气计数、r--射线能谱术及电子计算机等技术与显微荧光光度计密切结合的仪器，开创了荧光技术的又一个崭新的领域。 ;;;; 流式细胞仪的结构; 流式细胞仪的原理;;;;*前向角光散射 (Forward Scatter, FSC): 荧光信号在激光光束垂直的900方向,距喷嘴0.25mm处进行探测, 光散信号在前向小角0.50 ～ 2.00 的测定值, 称为 “前向角光散射 (FSC) ”, 这种光散信号基本上反映细胞体积的大小。 ; *侧散射（Side Scatter, SSC)：荧光信号在激 光光束垂直的900方向, 距喷嘴 0.25 mm处进行 探测, 细胞发出的荧光经荧光光电倍增管 (PMT) 积分放大后得到光散信号，称为 “侧散射，S SC )”, 它是荧光着色的反映，其单位为“道数 (channel)”,表示荧光信号或散射光信号强度的 相对值。; 流式细胞术方法学的发展; 流式细胞术的技术特点; 影响流式细胞术定量分析的因素; 流式细胞术对荧光染料的要求;用于流式细胞免疫学的荧光染料 ; 用于流式细胞免疫学的荧光染料;用于流式细胞免疫学的荧光染料;流式细胞技术的基本实验步骤;; ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ;A. ??????????????????????????? B. ???????????????????????????C. ?????????????????????????? ;流式细胞术的荧光染色;影响荧光染色的各种因素; 流式细胞免疫荧光技术的应用;常用的免疫荧光染料 ;流式细胞分析原理;; 细胞分选原理;;细胞分选方式 ;;; ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? Fig.1.Quantifying FACS data. This graph shows the number of cells (X-axis) and the level of fluorescence emitted (Y-axis) by the labeled cells. Many different colors can be plotted on this graph, but cells should not be labeled by more than one color. ;Fig.2. Quantification of FACS data. This graph compares the number of cells labeled by two colors-red (Y-axis) and green (X-axis). The intensity of the emitted light increases as indicated by the arrows. The number of cells at each intensity is shown by the number of dots where each dot represents a single cell. This graph does not work for more than two colors but it works well when individual cells can be labeled by both colors at the same time. ;; 流式细胞术的数据显示 ;;;;；;;;;;数据分析;;;流式细胞术对细胞DNA的测定; 流式细胞术DNA检测的荧光染料;流式DNA定量分析的染色原理; 染料分子与DNA结合;注意：有些染料(PI、EB等)不能穿过细胞膜，不能对活细胞进行染色。必须把细胞固定后或应用去污剂在细胞膜上打孔，才能把染料引入细胞内。有些染料能染双链DNA和RNA，若染DNA，必须在荧光染色前用RNA酶将RNA消化掉，去除干扰。 ;; ??????????????