生物分离工程第5章_初级分离.pptVIP

初级分离;;;第一节 杂质种类;（一）高价无机离子的去除方法;（二）杂蛋白的去除方法;在酸性溶液中，蛋白质与一些阴离子，如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀； 在碱性溶液中，蛋白质与一些阳离子，如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+和Pb2+等形成沉淀。;2. 变性法 ;加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。 在四环素类抗生素中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化锌钾的胶状沉淀来吸附蛋白质； 在枯草杆菌发酵液中，加入氯化钙和磷酸氢二钠，两者生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中除去。 这些沉淀方法既可以作为除杂质的方法，也可以作为提取目标产物的技术手段。 ; 酶解法可将混合液中的不溶性多糖物质酶解，使其转化为溶解度较大的单糖，从而改变流体的流动特性，提高过滤速率。 例如：万古霉素用淀粉作培养基，发酵完成后，发酵液中多余的淀粉使混合液粘度较大，当加入0.025％的淀粉酶后，搅拌30min，再加2.5％助滤剂（硅藻土），可使过滤速率提高5倍。 ; 发酵液中有色物质可能是由于微生物生长代谢过程分泌的，也可能是培养基（如糖蜜、玉米浆等）带来的，色素物质化学性质的多样性增加了脱色的难度。 色素物质的去除，一般以使用离子交换树脂、离子交换纤维、活性炭等材料的吸附法来脱色最为普遍。例如活性炭可用于柠檬酸发酵液的脱色，盐型强碱性阴离子交换树脂可用于解朊酶和果胶酶溶液的脱色，磷酸型阴离子交换树脂被用于谷氨酸发酵液的脱色等。 一般发酵液的脱色往往是在过滤除去菌体后进行。;第二节 沉淀分级;生物分子在水中形成稳定的溶液是有条件的，这些就是溶液的各种理化参数。任何能够影响这些条件的因素都会破坏溶液的稳定性。 沉淀法就是采用适当的措施改变溶液的理化参数，控制溶液的各种成分的溶解度，从而将溶液中的欲提取的成分和其它成分分开的技术。;沉淀和结晶的区别: 形态：不定形 成分纯度：纯度较低 操作方式可分连续法或间歇法两种，规模较小时，常采用间歇法。 ;沉淀法操作步骤 ： ①加入沉淀剂。 ②沉淀剂的陈化，促进粒子生长； ③离心或过滤，收集沉淀物。 加沉淀剂的方式和陈化条件对产物的纯度、收率和沉淀物的形状都有很大影响。 ;沉淀技术分离生化产物的典型例子是蛋白质的分离提取。 优点：设备简单、成本低、原材料易得、便于小批量生产； 缺点：所得沉淀物可能聚集有多种物质，或含有大量的盐类，或包裹着溶剂，产品纯度常比结晶法低，过滤也较困难。;eg. 从血浆中通过5步沉淀生产纯度高达99%的免疫球蛋白和96%~99%的白蛋白。;沉淀法分离蛋白质的特点： 生产前期可使原料液体体积很快减小10~50倍，从而简化生产工艺、降低生产费用； 使中间产物保持在一个中性温和的环境； 可及早将目标蛋白从其与蛋白水解酶混合液中分离出来，避免蛋白质的降解，提高产物稳定性； 用蛋白质沉淀法作为色谱分离的前处理技术，可使色谱分离使用的限制因素降低到最少。;蛋白质的溶解特性;图2 蛋白质分子表面的憎水区域和荷电区域;蛋白质性质;蛋白质胶体溶液的稳定性;蛋白质可以看作是一个表面分布有正、负电荷的球体，这种正、负电荷是由氨基和羧基的离子化形成的，换句话说，该球体是带有均衡电荷分布的胶体颗粒。因此，蛋白质的沉淀，实际上与胶体颗粒的凝聚和絮凝现象相似。 ;蛋白质粒子在水溶液中是带电的，带电的原因主要是吸附溶液中的离子或自身基团的电离。因溶液是电中性的，水中应有等当量的反离子存在。蛋白质表面的电荷与溶液中反离子的电荷构成双电层。 ;图3;;吸引力;;DLVO理论;其他沉淀法;一、中性盐盐析法;中性盐盐析法：破坏水化层、中和表面电荷;离子强度对盐析过程的影响;β和Ks的物理意义;; 常数Ks代表图中直线的斜率；β代表截距，即当离子强度为零，也就是纯水中的假想 溶解度的对数。从一些实验结果表明，Ks与温度和pH无关，但和蛋白质与盐的种类有关。 但这种变化不是很大，例如以硫酸铵作为沉淀剂时，Ks值对不同的蛋白质来说，其变化不会超过1倍。组成相近的蛋白质，分子量越大，沉淀所需盐的量越少；蛋白质分子不对称性越大，也越易沉淀。 ;影响盐析的因素;用盐析法分离蛋白质的二种方法; 其中，Ks盐析法（改变盐浓度）由于蛋白质对离子强度的变化非常敏感，易产生共沉淀现象，因此常用于提取液的前处理。 而β盐析法（改变pH及温度）由于溶质溶解度变化缓慢，且变化幅度小，因此分辨率更高，常用于初步的纯化。;盐析用盐的选择;选用盐析用盐的几点考虑 ; 常用于蛋白质沉淀的盐为硫酸铵、硫酸钠和氯化钠。 硫酸铵在水中的溶解度很高但具腐蚀性，偏酸性，溶解后溶液pH下降，高pH会释放氨。后处理困难，残留在