第1周培养基的制备与灭菌.pptVIP

微生物学实验;第一章 培养基的制备与灭菌;培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无机盐类以及生长因素等五大类营养成份。此外还得有适宜的PH值，一定的渗透压（即浓度）以及氧化还原电位等。;1、培养基的分类;天然培养基制作－－－－PSA培养基：用于分离和培养真菌（了解此次不做） 马铃薯 200 g,葡萄糖 (或蔗糖)10-20 g,琼脂17-20 g,水1000 mL; 将马铃薯洗净去皮,加水1000 mL煮沸30 min,用纱布滤去马铃薯,加水补足1000 mL,然后加糖和琼脂,加热使琼脂完全熔化,分装入三角瓶.;2、培养基的配制;;;注意事项： （1）不要使培养基沾在管口，如沾上，需用干净的纱布擦干净。 （2）液体培养基：分装高度以试管的1/4左右为宜。 （3）固体培养基：分装试管，其装量为管高的1/6~1/5灭菌后制成斜面。分装三角瓶容量之一半为宜。 （4）半固体培养基：分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后，垂直待凝成半固体深层琼脂。;（6）做棉塞 装好培养基的试管都要加上棉塞，这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发，制棉塞的方法多种，形状各异，总原则如下： （1）用脱脂棉制作（脱脂棉花易吸水） （2）松紧适合 （3）塞头不要太大，一般为球状。 （7）包装 试管口或三角瓶口棉塞部分，用牛皮纸扎，以防灭菌时水蒸气打湿棉塞。;（8）灭菌 灭菌是指杀死物品上或环境中的所有微生物。 灭菌方法可分为四种：物理灭菌、机械灭菌、化学灭菌和生物灭菌。 物理灭菌：1、热力灭菌： 2、紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。 ;热力灭菌：;原理与区别;干热灭菌与湿热灭菌的区别：在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时水蒸汽穿透力强，水蒸汽的导热性也强。而且当蒸汽与被灭菌的物体接触凝为水时，又可放出热量，使被灭菌物体温度迅速增高，从而增加灭菌效力。 ;高压蒸汽灭菌;操作步骤：;（5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。 注意：压力未降至0??时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。 （6）自锅中取出灭菌好的培养基，放置稍冷却后摆成斜面，而后至37oC恒温箱培养24 h，无菌生长，方可保存备用。 应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽，否则虽然压力表已指15磅/时，但锅内的温度还只有100oC，结果往往造成灭菌不彻底。;;无菌水的制备：;培养皿的干热灭菌：;操作步骤：;;总结：培养基配制步骤与配方：;灭菌对培养基的影响;试验完成步骤：（4人一组）;思考作业题：