5.3血红蛋白的提取和分离 学案4 人教版选修一.doc

PAGE  5.3血红蛋白的提取和分离 学案 人教版选修一 1．凝胶色谱法 凝胶色谱法也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由 构成的微小多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质 进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 2．缓冲溶液 缓冲溶液的作用是 。缓冲溶液通常由 溶解于水中配制而成。生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例如：人体血浆的pH是 ，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。 3．电泳 电泳是指 。许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 以及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。 两种常用的电泳方法是 和 ，在测定蛋白质分子量时通常使用 。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它 以及 等因素。而在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中，SDS能使蛋白质发生 ，解聚成单条肽链，因此测定的结果只是 ；同时SDS所带的大量负电荷能掩盖不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于 。 4．蛋白质的提取和分离 蛋白质的提取和分离一般分为四步： 、 、 和 。 5．样品处理 血液由 和 组成，其中红细胞最多。红细胞的组成中，约99％是 ，其作用是 ，血红蛋白有 个肽链组成，其中每条肽链环绕一个 ，此基团可携带 。血红蛋白因含有 而呈现红色。 红细胞的洗涤 洗涤红细胞的目的是 。采集的血样要及时采用 分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的 ，将下层暗红色的 倒入烧杯，再加入 ，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至 ，表明红细胞已洗涤干净。 血红蛋白的释放 在 和 作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。 分离血红蛋白溶液 将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的 ，第2层为白色薄层固体，是 ，第3层是红色透明液体，这是 ，第4层是其他杂质的 。将试管中的液体用 过滤，除去 ，于 中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 透析 取1mL的血红蛋白溶液装入 中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的