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一、概述(一)维生素(维他命):指维持人体正常生命活动...
一、概述
(一)维生素(维他命):指维持人体正常生命活动所必需的一类天然的有机化合物 。
(二)测定维生素的意义
评价食品的营养价值;
开发利用富含维生素的食品资源;
指导人们合理调整膳食结构,防止维生素缺乏症;
研究维生素在食品加工、贮存等过程中的稳定性,指导制定合理的生产工艺条件及贮存条件,最大限度地保留各种维生素;
监督维生素强化食品的强化剂量,防止维生素摄入过多引起中毒。;(三)维生素的分类
按溶解性分为两大类:
脂溶性维生素:A、D、E、K等
水溶性维生素:B、C等;(四)维生素的主要理化性质
脂溶性维生素:
1.溶解性:不溶于水,易溶于有机溶剂。
2.耐酸碱性:维生素A、D对酸不稳定,对碱稳定;维生素E对酸稳定,对碱不稳定。
3.耐热、耐氧化性:维生素A、D、E耐热性好
维生素A易氧化,因含??键;维生素D不易被氧化;维生素E在空气中能被慢慢氧化,光、热、碱促其氧化。
水溶性维生素:
易溶于水,不溶于大部分有机溶剂
在酸性介质中稳定,在碱性条件下不稳定
易受空气、光、热、酶、金属离子的影响。;二、维生素A的测定
维生素A:由β-紫罗酮环与不饱和一元醇所组成的一类化合物及其衍生物的总称。包括A1和A2。
维生素A1:视黄醇,有多种异构体,可转化成多种衍生物。
类视黄素:维生素A2(3-脱氢视黄醇)、视黄醛、视黄酸、3-脱氢视黄醛、3-脱氢视黄酸是维生素A1的衍生物,具有维生素A同样的作用,总称为类视黄素。 ;紫外分光光度法测定维生素A的含量
1.原理
维生素A的异丙醇溶液在325nm波长处有最大吸收峰,其吸光度与维生素A的含量成正比。
2.试剂
维生素A标准溶液:视黄醇85%(或视黄醇乙酸脂90%)经皂化处理后使用。称取一定量的标准品,用脱醛乙醇溶解使其浓度大约为1mg/mL。临用前需进行标定。取标定后的维生素A标准溶液配制成10 I.U/mL的标准使用液。
[ ①标定:取维生素A溶液若干微升,用脱醛乙醇稀释3.00mL,在325nm处测定吸光度,用此吸光度计算出维生素A的浓度。
A 1 3.00
C = — × ——— × ——————
E 100 S×10
C——维生素A的浓度g/mL
A——维生素A的平均吸光度值
S——加入的维生素A溶液量uL
E——1%维生素A的比吸光系数:1835
②皂化处理见实验步骤 ];无水脱醛乙醇:取2g硝酸银溶入少量水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入盛有1L乙醇的试剂瓶中,振摇后,暗处放置两天(不时摇动促进反应)。取上层清液蒸馏,弃去初馏液50mL.
酚酞:用95%乙醇配制成1%的溶液。
1:1氢氧化钾
0.5mol/L 氢氧化钾
无水乙醚:不含过氧化物
异丙醇;3. 操作步骤
①、样品处理
皂化:称取0.5-5g充分混匀的样品于三角瓶中,加入10mL1:1氢氧化钾及20-40mL乙醇,在电热板上回流30分钟。加入10mL水,稍稍振摇,若有混浊现象,表示皂化完全。
提取:将皂化液移入分液漏斗,先用30mL水分两次洗涤皂化瓶(若有渣,可用经过脱脂棉过滤),再用50mL乙醚分两次洗涤皂化瓶,所有洗液并入分液漏斗中,振摇两分钟(注意放气),静止分层后,水层放入第二分液漏斗。皂化瓶再用30mL乙醚分两次洗涤,洗液倒入第二分液漏斗,振摇后静止分层,将水层放入第三分液漏斗,醚层并入第一分液漏斗。重复操作3次。;洗涤:向第一分液漏斗的醚液中加入30mL水,轻轻振摇,静止分层后放出水层。再加15-20mL 0.5mol/L的氢氧化钾溶液,轻轻振摇,静止分层后放出碱液。再用水同样操作至洗液不使酚酞变红为止。醚液静止10-20分钟后,小心放掉析出的水。
浓缩:将醚液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中,再用约25mL乙醚洗涤分液漏斗和硫酸钠两次,洗液并入三角瓶中。用水浴蒸馏回收乙醚,待瓶中剩余约5mL乙醚时取下减压抽干,立即用异丙醇溶解并移入50mL容量瓶中用异丙醇定容。;②、绘制标准曲线
分别取维生素A标准使用液0.00,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00mL于10mL容量瓶中用异丙醇定容。以零管调零,于紫外分光光度计上在325nm处分别测定吸光度,绘制标准曲线。
③、样品测定
取浓缩后的定容液于紫外分光光度计上在325nm处测定吸光度,通过此吸光度从标准曲线上查出维生素A的含量。;4、计算
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