不同水果中还原糖含量的测定.docxVIP

实验报告 ——不同水果中还原糖的含量测定与比较 目的 熟悉还原糖测定的基本原理； 熟练掌握用3,5二硝基水杨酸法测定还原糖的方法； 测定并比较常见水果中的还原糖含量，对平时食用提供参考。 二、原理 搜集相关资料知，常见水果（如：葡萄、柑橘、苹果、梨）中均含有较为丰富的还原糖，即单糖（如葡萄糖、果糖）和某些寡糖（如麦芽糖等），它们含有游离的醛基或酮基，具有还原性。 3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的原理：还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖含量。 三、实验器材 材料：新鲜水果：黑加仑，砂糖桔，秦冠苹果，皇冠梨； 仪器：电子分析天平、水浴锅、紫外可见分光光度计、移液枪、量筒、100mL容量瓶、吸管、玻璃漏斗、试管若干、研钵、三角烧瓶； 试剂： 标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，备用； DNS试剂：将0.63gDNS和26.2ml2mol/L NaOH溶液，加到50ml含有18.5g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加0.5g结晶酚和0.5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至100ml，存于棕色瓶中备用。 四、实验操作及数据记录  = 1 \* GB4 ㈠材料处理 取实验材料黑加仑，砂糖桔，秦冠苹果，皇冠梨，经（剥）削皮处理后，各取50g左右，放入研钵中研磨，至匀浆状； 分别准确称取2g果浆放于三角烧瓶中，并用编号标记，再加入约30ml蒸馏水，用封口膜封口，放入沸水浴中提取30min； 待冷却后，用分液漏斗过滤，并用蒸馏水冲洗玻璃棒及三角烧瓶，一同转移至100ml容量瓶中并进行标记（黑加仑→A；砂糖桔→B；秦冠苹果→C；皇冠梨→D），用蒸馏水定容，摇匀，即得到四种待测样品液；  = 2 \* GB4 ㈡制作标准曲线 取6支干净的试管，分别编号为0、1、2、3、4、5并按下表剂量依次加入相关试剂，进行标准曲线的制作； 表一 3,5二硝基水杨酸法定糖——标准曲线的制作 管号 试剂012345标准葡萄糖溶液（ml）00.20.40.60.81.0蒸馏水（ml）1.00.80.60.40.20DNS(ml)2.02.02.02.02.02.0置于沸水浴中煮沸5min，取出，用自来水冷却蒸馏水（ml）9.09.09.09.09.09.0葡萄糖含量（mg）00.20.40.60.81.0540nm处吸光度00.0420.1410.2460.3430.469 以标准葡萄糖含量(mg)作横坐标, 540nm处吸光值作纵坐标，作出标准曲线  = 3 \* GB4 ㈢测定样品液中还原糖的测定 取12支干净的试管，分别编号为A1、A2、A3，B1、B2、B3，C1、C2、C3，D1、D2、D3，并按表二剂量依次加入相关试剂，测定样品液的吸光值，操作方法与标准液类似，每种材料做三组。 表二 3,5二硝基水杨酸法定糖——样品液的测定 管号 试剂A1A2A3B1B2B3C1C2C3D1D2D3待测液（ml）0.20.40.60.20.40.60.20.40.60.20.40.6蒸馏水（ml）0.80.60.40.80.60.40.80.60.40.80.60.4DNS(ml)2.02.02.02.02.02.02.02.02.02.02.02.0 置于沸水浴中煮沸5min，取出，用自来水冷却蒸馏水（ml）9.09.09.09.09.09.09.09.09.09.09.09.0还原糖含量（mg）a1a2a3b1b2b3c1c2c3d1d2d3540nm处吸光度0.1450.3150.5520.0380.1290.2180.1450.3020.4740.0820.2010.327五、计算 根据测得的吸光光度值，剔除不在分光光度计最适测量范围内的数值，再将剩余的吸光度值(Y)代入标准曲线方程（y = 0.479x - 0.0327），得到测定时样品中还原糖的量(X) a，b，c，d ；(单位：mg) 按照下列公式分别计算（黑加仑→A；砂糖桔→B；秦冠苹果→C；皇冠梨→D）中还原糖的百分含量； W1、2、3（还原糖）=×100%