隐孢子虫的诊断学及流行病学近况.docVIP

隐孢子虫的诊断学和 流行病学近况 唐娜 201054442 隐孢子虫的诊断学和流行病学近况 唐娜 齐齐哈尔医学院 【摘要】　隐抱子虫病是一种在世界范围内流行的人兽共患寄生虫病,各种受感染的家畜是其主要传染源。本文介绍了近年来用于检测隐孢子虫的方法,包括病原学检测方法、免疫学检测方法、分子生物学检测方法。根据不同方法的敏感性和特异性,本文对所述方法的优缺点进行了对比分析,在具体实践中选择比较适合的隐孢子虫检测方法。以及对流行病学研究现状分析。 【关键词】　隐孢子虫;检验方法;流行病学;临床研究进展;综述 隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是一种全球性的人兽共患寄生虫病,有着重要的公共卫生意义。其病原隐孢子虫(Cryptosporidiumspp.)可广泛寄生于禽类、哺乳类、爬行类和两栖类等170种以上的人和动物,在家畜中主要引起腹泻和呼吸道症状,导致生产性能下降或死亡,在人类最常见的症状是腹泻,尤其是婴幼儿和免疫功能低下或缺陷者(如AIDS患者、癌症化疗患者、长期大量服用激素类药物的重症患者等)特别易感,感染后病情严重,甚至危及生命。目前隐孢子虫病已被列为引起人类最常见的6种复泻疾病之一,1986年,WHO将人的隐孢子虫病列为艾滋病的怀疑指标之一[1]。 1、隐孢子虫的诊断学 1.1　卵囊分离与纯化方法 目前,隐孢子虫卵囊分离纯化方法的原理大多是根据卵囊密度与纯化介质密度之间的差异,通过离心使卵囊与纯化介质、杂质分离。以下论述的卵囊分离与纯化方法都是利用这个原理,但优缺点各有不同。 1.1.1　甘油饱和盐水漂浮法 甘油饱和盐水漂浮法[3]是用甘油与饱和盐水的混合液作为介质分离隐孢子虫卵囊的。用该法收集的隐孢子虫卵囊液涂片、镜检结果:常见的隐孢子虫卵囊呈发亮、折光的球形体，该法被广泛应用于隐孢子虫的初步检测中。虽然该法从粪便样品中分离的卵囊含杂质少,但由于卵囊为无色透明的小球体,故需对隐孢子虫的形态非常了解或有熟练的显微镜镜检技术的人员才能准确找到隐孢子虫卵囊。 1.1.2不连续蔗糖密度梯度离心法 不连续蔗糖密度梯度离心法[3]是利用隐孢子虫卵囊的密度在1:4和1:2蔗糖液的密度之间,通过梯度的设定分离卵囊的方法。该法虽然比较耗时和复杂,但对卵囊浓集和纯化效果很好,比较适合于计数前的卵囊处理。 1.1.3饱和糖水漂浮法 饱和糖水漂浮法[4]是以饱和蔗糖水为介质,使离心后的隐孢子虫卵囊浓集于糖水表层,而其他密度大的杂质沉淀于糖水底层,达到使卵囊与杂质分离的目的。该法是目前比较常用的方法之一,用此法收集的卵囊不仅数量多,而且由于隐孢子虫卵囊的子孢子在饱和蔗糖溶液中呈淡粉色,卵囊壁为1层薄膜,卵囊液呈透明状,故在400倍显微镜下可清晰识别和计数。 1.2卵囊染色镜检方法 1.2.1　金胺-酚改良抗酸复染法 韩范等[5]将金胺-酚染色法和改良抗酸染色法结合起来,即经过金胺-酚染色后的标本,再用改良抗酸染色法复染,使所染隐孢子虫卵囊与非特异性颗粒着色明显不同,卵囊染为玫瑰红色,其他非特异性颗粒则染成蓝黑色。这2种方法的结合使不具备荧光显微镜的实验室亦可用金胺-酚染色标本,接着用改良抗酸染色法复染,再用光学显微镜检查。目前,该方法被广泛用于隐孢子虫病的流行病学调查和诊断中。 1.3　免疫学检测方法 1.3.1　直接和间接免疫荧光法 直接和间接免疫荧光法的原理都是在抗原与抗体特异性结合,发生免疫学反应后,在荧光素的作用下通过显色来鉴定隐孢子虫的存在。ＴｈａｄｄｅｕｓＫ.等人用直接免疫荧光法和间接免疫荧光法测隐孢子虫的检出率,结果两种方法的敏感性均为100%,而且不同种的隐孢子虫用这两种方法检测具有相似的特异性。此实验说明用直接免疫荧光法和间接免疫荧光法检测隐孢子虫在常规条件下都具有较高的可行性。直接免疫荧光法操作简便,特异性高,非特异荧光染色因素少,只是敏感度偏低,每检查1种抗原需制备相应的特异荧光抗体;间接免疫荧光法灵敏度高,而且在不同抗原的检测中只需应用1种荧光抗体,较适于常规操作。 1.3.2　酶免疫荧光法 酶免疫荧光法是采用检测试剂盒,将隐孢子虫抗原的特异性抗体连接到96孔酶标板表面,依次加入待测样品、特异性酶标记抗体、发色底物,根据颜色的变化检测粪便中是否有隐孢子虫。ＲａｙｍｏｎｄＣｈａｎ等用此试剂盒检测隐孢子虫,结果敏感性为98.7%,特异性为100%。还有其他人做过这方面的试验,结果均表明酶免疫荧光方法是1种快速且高效的隐孢子虫检测方法。 1.4　分子生物学检测方法 1.4.1　常规ＰＣＲ　常规ＰＣＲ是以少量隐孢子虫ＤＮＡ为模板,通过1轮ＰＣＲ扩增获得预计扩增片段,