实验 壬基酚对红鲤鱼急性毒性.pptVIP

实 验 一 壬基酚对红鲤鱼的急性毒性;毒理学中研究外源化学物的基础毒性主要是进行体内试验，即是以实验动物为研究对象，最终向外源化学物毒害主体—-人类外推。选用的动物体重差异不应超过平均体重的10%。为判定受试物对不同性别动物的毒性反应有否差异，除特殊要求外，实验中一般均应采用两种性别动物进行试验。所用动物进入实验室后，于实验开始前应观察一周以上，以删除不健康的动物，并使实验动物适应环境。受试生物的选择方法和标准见理论课教材。;实验目的： 1、学习急性毒性试验的原理和方法； 2、探求化学污染物的致死剂量，以初步评估其对人类的可 　　能毒害的危险性； 3、掌握半数致死剂量LD50或半数致死浓度LC50计算方法和意 　义（结果评定)； 4、学习化学污染物急性毒性的评价方法。 ;急性毒性试验：是指以某种接触途径将受试物（外源性化学物）高剂量一次性给予或24h内多次给予受试物后，在短时间内观察动物所产生的毒性反应，这样的试验即急性毒性试验。试验测定致死的和非致死的指标参数，致死剂量通常用半数致死剂量LD50或半数致死浓度LC50来表示。LD50或LC50：一定时间内能够引起受试生物50％死亡的单一受试物剂量或浓度，是经过记录、统计后计算得的估计值。LD50的计算参考以下公式：（农药登记毒理学试验标准 GB 15670—1995/fujian/standard/guojiabiaozun/gbm/M156700j.htm）1gLD50=Xk-d(∑Pi-0.5)Xk—最大剂量对数，d—等比级数，Pi—各组死亡率，i—组号;95％可信限＝log-1(logLD50±1.96SlogLD50) ;试验动物的饲养环境 恒定的温度：22±3℃ 湿度：30~70% 照度：昼夜各半 饲料合格、饮水合格、垫料合格;染毒途径的选择: 染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式；有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。 最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。 ;染毒剂量与分组: 1．查阅文献 ①了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。 ②确定使用哪一种计算方法求LD50，然后再设计剂量分组。LD50的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍思法等。 ③找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LD50(或LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值。 ;实验分成3个染毒剂量组和1个未染毒对照组，每组数量相同，平均体重（13.9±3.80）g，分别置于30L水池中。染毒组剂量分别设计为50、100和200mg/kg(NP质量/鱼体重，下同)。染毒方式为腹腔注射，注射前后各12小时不喂食，各剂量组注射体积为每尾200μl。NP-食用油溶液：染毒剂量的设计参考文献3。先对购买的鱼称平均重量,按照每条鱼注射200ulNP-食用油溶液配制50mg/kg体重、100mg/kg体重、200mg/kg体重溶液，配好后装在试剂瓶中避光保存。 ;2．预试验 ①设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并在该剂量的上下以3倍之差各设计l一2个剂量组作为预试验剂量。 ②根据确定的剂量组进行染毒。 ③根据预试验的死亡资料确定组距。 可根据以下公式计算出剂量分组： i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1) 或：i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1) 式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)； n为设计的剂量组数。;3．正式试验; 一般来说、根据试验设计所选用的LD50计算方法来确定组数。例如几率单位法、寇氏法一般设6～10个剂量组；霍恩法固定设4个剂量组。求得i值后，以最低剂量组(LD0或LD10)的对数剂量加上一个i值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数即得出各组剂量的真实值. 1 2 3 4 5 6 LgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i ??? ;1、红鲤鱼的驯养：从市场购来大小相近的红鲤鱼，平均体长实验前现测，在实验室驯养一周。染毒前禁食12小时。 2、预试验： 　各组自己设计浓度，然后组长分工运行该试验。 （1）分缸：取三个12升的玻璃缸，加入驯养缸中的源水各9升，每升处标上刻度线。按生物测