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免疫胶体金技术 Immunogold Technique;一. 概述; 下金颗粒可见性的方法 1983年 Moeremans等 在蛋白质转移电泳中应用了免疫金银染色法 1986年 Fritz等 在免疫金银法基础上成功进行了彩色免疫金银染色 ; 免疫胶体金技术 以胶体金为标记物应用在免疫组织化学研究中，对细胞表面或细胞内的多糖、糖蛋白、蛋白质、多肽、激素和核酸等生物大分子进行定位研究;（二）胶体金的基本概念 胶体金，一般指金的水溶液，又称金溶胶。 ---金以微小的粒子分散在水中所形成的金 溶胶。其中分散的金颗粒直径在1~100nm 之间。 ; 二. 胶体金的制备 ; 化学还原法;（二）影响溶胶稳定性的因素 电解质 胶体金浓度 温度 大分子物质 ;（三）胶体金的鉴定 ;（四）制备胶体金的注意事项 ;三. 胶体金探针的制备;（二）胶体金的预处理 标记之前将胶体金的PH值调至待标蛋白质的等电点或略偏碱 调节PH的方法： 当需要提高胶体金的PH值时，用0.2mol/L K2CO3或0.1mol/L KOH 当需要降低胶体金的PH值时, 用0.1M HCL或醋酸 ;(三) 待标记蛋白质的处理 1. 透析除盐: 将蛋白质溶液装入透析袋中, 放 在蒸馏水中透析, 4℃过夜 2. 离心: 10000 r/min, 4℃, 1h, 去除蛋白质聚 合物等沉淀 ;(四) 胶体金蛋白质最佳结合率测定 不同直径的金颗粒, 及不同分子量大小的蛋白质, 其结合的比例是不同的 常用的检测二者结合量的方法有目测法和光电比色法;1. 目测法 ;1;2. 光电比色法;(五）标记 ;常用几种蛋白质标记时胶体金的 PH;3. 磁力搅拌下，逐滴加入蛋白质溶液，作用 5～15min 4. 继续磁力搅拌，加入5％牛血清白蛋白，使其终浓度为1％，搅拌10min；也可加3％聚乙二醇，使其终浓度为0.05％;（六）标记探针的纯化; 1. 超速离心法;2. 凝胶过滤法 ;(七) 标记探针的鉴定;四. 免疫胶体金染色方法; (一)免疫金染色法 Immunogold staining, IGS;;【特点】 1. 阳性部位显红色 2. 染色程序简便, 不需显色或显影过程 3. 但一般要求金颗粒的直径20nm, 并要求用 高浓度的免疫金溶液; (二) 免疫金银染色法 Immunogold silver staining, IGSS ;1. 光镜免疫金银法 在免疫金染色的基础上增加物理显影的步骤 显影液的配制及显影过程应在暗处进行 阳性部位呈黑色颗粒状 2. 电镜免疫金银法 包埋前染色, 包埋后染色;【IGSS法优点】 ; (三) 彩色免疫金银染色法 Coloured IGSS, CIGSS ;五. 免疫胶体金技术的特点