生物-1.1“DNA重组技术基本工具”课件(新人教版选修3).pptVIP

现代生物技术专题 结合图片来说一说什么是基因工程？ 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术或基因拼接技术。 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物 DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物问世 PCR技术的发明 基础理论 技术发明 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 重组DNA 导入 拼接 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 普通棉花不具有抗虫性，科学家发现苏云金芽孢杆菌能够产生一种毒蛋白，对棉铃虫有一定的杀伤作用。 试设计一个简单的方案，使棉花对棉铃虫也有抵抗作用. 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 思考： 1、怎样从苏云金芽孢杆菌体内提取毒蛋白基因？ 2、这类酶主要在哪些生物中能够找得到？为什么主要存在于这一类生物？ 3、这一类酶有什么作用？ A T G C 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 主要是从原核生物中分离纯化出来的一类酶。 1、来源： 4000种 2、种类： 3、作用： 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 形成两种末端 黏性末端 平末端 4、结果： 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，例如，EcoRΙ、SmaΙ，也有少数有4、5或8个核苷酸组成。 G A A T T C C T T A A G 中轴线 C T T A A G A A T T C G 大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，SmaI识别CCCGGG序列: C C C G G G G G G C C C C C C G G G G G G C C C 黏性末端 平末端 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端。 是不是把两者的黏性末端黏合起来，这样就真的合成 重组的DNA分子了? 思考题： G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 同种限制酶切割 磷酸二酯键 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 二、DNA连接酶——“分子缝合针” G A A T T C C T T A A G 即脱氧核糖、磷酸基之间的连接 G P A P 思考： DNA连接酶作用是什么？DNA连接酶和DNA聚合酶的区别是什么？ DNA连接酶： 连接DNA上黏性末端 磷酸二酯键（扶手） 基因工程拼接