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　　石蜡组织芯片制备技术的改良 【摘要】 目的:探讨组织芯片制备 方法 以及相关技术改良，提高组织芯片制备的质量。方法:使用组织芯片空心蜡模一次性成型的模具， 应用 改良的组织芯片制备方法以及二次石蜡包埋技术，制作食管癌肿瘤组织芯片，常规病理石蜡切片制备组织芯片，观察实验结果。结果:组织芯片空心蜡模制备成功率达100%。所制备的组织芯片石蜡块内组织芯切片平面整齐，无组织芯倒浮现象。组织芯片切片中组织芯片微组织片阵列整齐，无微组织片皱褶以及微组织片脱片现象。组织芯片常规HE染色后，经病理诊断医生阅片，并与各组织芯原供体石蜡标本常规病理HE染色片进行对照观察，病理诊断结果一致。结论:改良的石蜡组织芯片制备技术简单易学，操作流程容易掌握控制，提高了组织芯片制作的质量，有利于组织芯片技术的普及和推广应用。 【关键词】 组织芯片 技术改良 食管癌 组织芯片技术是继基因芯片、蛋白质芯片后又一重要的生物芯片技术平台，它是将数十个甚至数千个不同个体的组织标本集成在一张固相载体上所形成的组织微阵列[1]。组织芯片作为一种高通量、大样本以及快速的生物分子水平 研究 分析 工具，克服了传统病 理学 方法和基因芯片技术中存在的某些缺陷，在医学分子生物学研究领域发挥了愈来愈重要的作用，对于疾病的分子诊断，预后指标和 治疗 靶点的定位、抗体和药物筛选等均有十分重要的实用价值，是疾病研究从基础研究走向临床应用研究重要的桥梁[2-6]。本研究针对现有组织芯片制备过程中存在的一些不足，如组织芯片空心蜡模制备操作程序较为繁琐以及组织芯片石蜡块二次包埋质量欠佳等，研究探索出一种行之有效的组织芯片制备方法，有利于组织芯片技术在医学临床、病理学等研究领域的进一步推广应用。 1 材料和方法 1.1 材料 收集温州医学院附属台州 医院 2004年9月至2007年2月间手术离体食管癌组织标本30例。对组织标本手术切缘至癌灶部全程黏膜组织以及癌灶组织进行取材，分段处理。所有标本均经过10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片以及组织病理学检查证实。每例食管癌组织标本均包含有：癌组织、不典型增生以及正常食管黏膜组织。石蜡切片机（lEica RM 2135）、一次性石蜡切片刀片均购自德国徕卡公司。组织芯片制备系统（HT-1）购自朝阳恒泰 科技 发展 有限责任公司。 1.2 制作组织芯片空心蜡模 利用组织芯片空心蜡模成型模具，一次成型制作组织芯片空心蜡模，具体操作如下：①将石蜡放入组织芯片制备系统熔蜡盘内加热熔化，熔蜡盘内放入一片适当大小的硬质光面塑料薄板。将空心蜡模成型框大口朝下平放于熔蜡盘中的塑料薄板上，调整熔蜡盘内石蜡的量，使熔化石蜡平面高出空心蜡模成型框约2 mm。②将无刃阵列管针管口朝下放置于组织芯片制备系统加热板上预热（70 ℃）约10 min，平稳垂直插入上述空心蜡模成型框。③平稳移开熔蜡盘，室温冷却石蜡数分钟，熔蜡盘中石蜡呈半凝状态时，下压空心蜡模成型框活动顶板，使其贴近蜡模成型框。④用小刀将空心蜡模成型框四周石蜡划离，继续室温冷却石蜡数分钟，熔蜡盘中不再有任何能流动的液体状石蜡。⑤将熔蜡盘放回组织芯片制备仪上加温数秒钟，熔蜡盘底部石蜡开始熔化时迅速整体移除阵列管针、蜡模成型框、蜡模成型框内的蜡模。⑥插入阵列管针针芯，推出并去除进入阵列管针内的石蜡，拔除阵列管针针芯，去除蜡模成型框外部残留的石蜡。⑦使用组织芯片空心蜡模拔模装置，均匀拔除阵列管针，去除蜡模成型框活动顶板以及蜡模成型框周边残留的石蜡。组织芯片空心蜡模制备完毕（见图1）。组织芯片空心蜡模无需从蜡模成型框中取出。 1.3 制作组织芯片石蜡块 ①目标组织定位：组织芯片供体蜡块常规病理切片1张，片厚4μm，常规HE染色后进行组织病理诊断阅片，在组织切片的指引下，对相应供体蜡块进行目标组织定位标记。②组织芯片蜡芯取材与点样：将蜡块放入适当温度的热水中预热软化片刻，应用组织芯片制备系统的芯片石蜡组织芯取样器钻取目标组织柱。目标组织柱逐一点样于组织芯片空心蜡模中指定的位置。用实心单针逐一将目标组织柱轻轻压平，使其处于同一切片平面。将装满组织芯的蜡模平行移至一块薄铜板上，加热铜板数秒至贴近铜板的蜡模稍加熔化，迅速移除铜板，室温冷却数秒后去除铜板。③二次包埋组织芯片石蜡块：芯片组织面朝下，将点好样的组织芯片蜡块连同蜡模成型框放入盛有少量熔化石蜡的熔蜡盘中（熔化石蜡的深度约4 mm），数秒种后即可肉眼观察到熔化的石蜡浸入到石蜡组织芯与蜡模孔的间隙。移除熔蜡盘，将塑料石蜡包埋盒放于蜡模成型框上，用小勺舀取熔化的石蜡倒入包埋盒中，室温冷却数分钟，石蜡半凝状态时用小刀划离蜡模成型框周围的石蜡。石蜡完全凝固后，复加热熔蜡盘移除二次包埋好的组织芯片石蜡块。④去除蜡模成型框以及塑料石蜡包埋盒周边残留石蜡，轮流加热蜡模成型