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神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响.doc
神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响
【摘要】 目的 观察神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响。 方法 建立脊髓损伤动物模型,脊髓内注射神经干细胞,采用改良Gale联合评分法评价神经功能,通过HE染色及尼氏体染色观察脊髓灰白质及神经元的组织学改变。 结果 脊髓损伤神经干细胞移植组大鼠感觉、运动功能恢复明显(Plt;0.05);灰、白质中出现小片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少程度较脊髓损伤组轻,损伤坏死区胶质细胞较脊髓损伤组增多(Plt;0.05)。 结论 使用神经干细胞移植能减轻神经细胞坏死程度,减轻脊髓损伤,并使损伤坏死区胶质细胞增多,促进脊髓损伤的修复,对脊髓损伤大鼠感觉、运动功能的恢复有促进作用。
【关键词】 神经元,干细胞; 脊髓损伤; 组织学; 疾病模型,动物
脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)是临床上常见的疾病,致残率高, 治疗 效果不理想,多以不全瘫或全瘫为结局,严重影响患者的生活质量。因此SCI后功能恢复的研究一直是神经 科学 研究的难点和热点。近年来,神经干细胞(neural stem cells, NSC)的移植给SCI后治疗带来新的希望。NSC具有多潜能、自我复制和更新、未分化等特征。本研究通过在损伤脊髓的局部移植NSC,观察行为学和组织学方面的变化,初步探讨NSC对损伤脊髓局部神经细胞的影响及其表达功能的调节。
1 动物与方法
1.1 动物与仪器试剂 SpragueDapus公司);立体定位仪(江湾C型,上海第二军医大学);微量注射器(1 μL,美国Sigma公司);组织切片机(LEica2135型,德国)。脱毛剂:8%硫化钠水溶液;10%甲醛水溶液;1%伊红水溶液;10%苏木素;缓冲亚甲蓝染液;0.2%醋酸盐缓冲液;4%钼酸铵液;NSC(由福建医科大学分子医学211工程实验室提供)漂洗3次,含量为105 μL-1。
1.2 方法
1.2.1 分组 大鼠随机分3组:(1)对照组10只,仅暴露硬脊膜。(2)SCI组30只,用3%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后,俯卧位固定,显露T9T11棘突,咬除T10棘突及椎板,暴露硬脊膜,应用Allen打击法致SCI,打击势能50 gcm,损伤部位注射等量生理盐水,并于SCI后2、5、12 d各取10只大鼠处死,取SCI部位上下各4 mm脊髓,行HE染色和神经尼氏体染色。(3)NSC移植组30只,于SCI后即刻注射NSC。注射时用微量注射器吸取NSC 1 μL,应用立体定位仪于T10平面脊髓后动脉旁开0.5 mm注射,深度1 mm,5 min内注射完毕,留针3~5 min,并于注射NSC后2、5、12 d各取10只大鼠处死取材,取材范围及染色方法同SCI组。
1.2.2 行为学及组织学观察 神经功能评价标准采用改良Gale联合评分法(改良CBS法)[1]。检测项目是:开放空间运动能力、脚趾伸展、触地反应、回缩反射、矫正反射、斜板试验及游泳试验。评分以正常为100分,后肢全瘫为0分。常规HE染色,光镜观察脊髓出血、水肿等;神经尼氏体采用Pischingert氏亚甲蓝染色法,光镜观察神经细胞肿胀、变性、坏死及尼氏小体变化等。
1.3 统计学处理 数据以x±s表示,采用SPSS 10.0软件进行统计学分析,组间比较采用单因素方差分析。
2 结 果
2.1 行为学观察结果 NSC移植组大鼠感觉、运动功能恢复明显,与SCI组及对照组比较,差别有统计学意义(Plt;0.05,表1)。
2.2 SCI前后及NSC移植后组织学变化 SCI组于SCI后2 d,脊髓灰、白质中出现片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少甚至消失,且随距损伤处距离的延长而逐渐减轻;于SCI后5 d,损伤坏死区有胶质细胞增生,伤后12 d增生更加明显(图1)。表1 大鼠改良CBS评分与脊髓损伤组比较,△:Plt;0.05;与对照组比较,☆:Plt;0.05.NSC移植组损伤后2 d,灰、白质中出现小片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少程度较SCI组轻;损伤后5 d及12 d,损伤坏死区胶质细胞均较SCI组增多(图2)。
3 讨 论
SCI是一种常见而严重的临床疾患。我国发病率约每年6.7人/百万人,以中青年胸腰段损伤最多。常导致患者损伤平面以下感觉、运动功能减退
A~D:脊髓损伤后2 d(A:×40;B~D:×400);灰、白质中出现片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少甚至消失,且随距损伤处距离的延长而逐渐减轻;E:脊髓损伤后5 d(×100),损伤坏死区有胶质细胞增生;F~G:脊髓损伤后12 d组(F:×100;
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