苯乙酸对胶质瘤C6细胞中c.docVIP

　　苯乙酸对胶质瘤C6细胞中c 作者：黄少伟，杨朝华，李齐广，吴全理，罗大山，王光绿 【摘要】 目的 观察诱导分化剂苯乙酸（phenylacetate，PA）对c-myc和Caspase-3表达的 影响 ，探讨PA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制。 方法 体外培养胶质瘤C6细胞，实验组给予PA浓度5.0mmol /L诱导72h，对照组不用PA，分别用免疫细胞化学检测c-myc和Caspase-3的表达，图像 分析 比较表达水平的差异。结果 免疫细胞化学检测，两对照组和实验组中c-myc的表达分别为0.214±0.013和0.153±0.007，Caspase-3的表达分别为0.149±0.004和0.206±0.033。结论 PA能够下调c-myc的表达和增强Caspase-3的表达，其诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制可能与此有关。 【关键词】 苯乙酸酯类；神经胶质瘤；细胞凋亡 　　Abstract: Objective To study the effects of differentiation inducer phenylacetate (PA) on the expression of c-myc and Caspase-3 in rat C6 glioma cells and explore the mechanism of PA action. Methods C6 glioma cells ent group, C6 cells mol/L for 72 hours. In control group, no PA inistrated. The expression of c-myc and Caspase-3 munocytochemistry technique. The differernces of the imaging presentation in the tyc in control group and experiment group yc and enhance the expression of Caspase-3, ight consequently induce apoptosis in C6 glioma cells. 　　Key a; apoptosis 　　诱导分化剂苯乙酸（phenylacetate，PA）是一种苯丙氨酸的脱氨基产物，正常情况下以低浓度存在于人脑脊液和血液，能降低血浆中谷氨酰氨水平，对人体无毒副作用，1994年Samid［1］发现PA对胶质瘤有诱导分化和抑制生长作用。此外 研究 发现PA对子宫颈癌［2］、乳腺癌［3］和肾癌［4］等多种肿瘤也有抑制作用，PA具有很好的临床 应用 前景。在国外PA已进入Ⅱ期临床试验，但作用机理尚未完全清楚。前期的研究发现PA能诱导胶质瘤C6细胞凋亡［5］，笔者主要研究PA对c-myc和Caspase-3表达的影响，探讨PA诱导凋亡的机制。 　 　1 材料与方法 　　1.1 材料 大鼠胶质瘤C6细胞（引自 中国 科学 院上海细胞生物学研究所）；RPMI 1640培养基（Gibco,美国）； 苯乙酸（sigma,美国）；SABC免疫组化检测试剂盒（武汉博士德公司）；c-myc和Caspase-3一抗（兔抗大鼠，武汉博士德公司）；CO2培养箱(SANYO,日本)；倒置光学显微镜IMT-2-12型（OLYMPUS，日本）；OLYMPUS采集图像系统；LaserPix图像分析系统（Bio-Rad,UK）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养 C6细胞以5×105/ml在100ml培养瓶中单层培养，置37℃、5%CO2恒温恒湿培养箱中培养，RPMI 1640培养基加入10%热灭活胎牛血清，碳酸氢钠2g/L，青霉素100u/ml，链霉素100μg/ml，取对数生长期的细胞进行实验。 　　1.2.2 免疫细胞化学检测c-myc和Caspase-3的表达 将经多聚赖氨酸处理的盖玻片放入6孔板中，C6细胞以5×105/ml接种培养，24h后更换为含有PA的培养基，浓度5.0mmol/L，培养72h后取出盖玻片，PBS洗涤2次，用4%多聚甲醛缓冲液固定30min，PBS洗涤3次。按试剂盒说明进行检测操作(一抗工作浓度c-myc 1∶25，Caspase-3 1∶100)。结果判断: c-myc和Caspase-3阳性表达均位于胞浆内，呈棕黄色。用OLYMPUS采集图像系统采集图像，LaserPix图像分析系统进行图像分析，在统一放大倍数(400倍)下测定平均光密度(mean density，MD)，进行分析。 　　1.3 统计学处理 每个实验重复5次，计量资料结果数据表示为±s，作t检验，分析用软件SAS8.02完成。