茅苍术药材高效液相色谱.docVIP

　　茅苍术药材高效液相色谱 作者：贾晓东 赵兴增 王鸣 郭可跃 赵友谊 冯煦 【摘要】 　　目的研究茅苍术的HPLC-ELSD指纹图谱。方法高效液相色谱法，蒸发光散射检测器(ELSD)，水（0.25%乙酸）-乙腈梯度洗脱；流速0.6 ml/min；柱温30℃。ELSD条件：不分流；漂移管温度112.8℃；空气流量3.1 L/min。结果共有10个共有峰，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）》得出了茅苍术药材的对照指纹图谱。精密度、稳定性、重复性实验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均lt;3％。结论 该指纹图谱方法简便、重复性好，为有效地控制茅苍术药材的内在质量提供了 科学 依据。 【关键词】 茅苍术 指纹图谱 高效液相色谱 蒸发光散射 　　苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea (Thunb.) DC.或北苍术Atractylodes chinensis (DC.) Koid Z.的干燥根茎［1］。始载于《神农本草经》，苍术性辛、苦、温，归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目作用。主治脘腹胀满、泄泻、水肿、风湿痹痛、风寒感冒等，中医临床使用 历史 悠久。其中尤以产于江苏茅山地区的茅苍术品质最好。茅山地区是茅苍术的道地产区。但近年来国际市场对苍术的需求量日益增加，茅苍术被掠夺性采挖，加之对茅苍术生态环境的人为破坏，造成茅苍术资源的枯竭，使其濒于灭绝［2］。为了保护这一珍贵资源，需对其优良品质进行分析。查阅相关 　　表3 茅苍术指纹图谱的技术参数（略） 　　3.2 共有指纹峰面积的比值通过10批药材测定，以图谱中苍术苷A为参照物（S），将各特征指纹峰面积与同一图谱中参照物的峰面积比较，其比值为特征指纹峰的相对峰面积。据“中药注射剂指纹图谱研究的技术要求”规定，各共有指纹峰的面积比值必须相对固定。峰-4单峰面积占总峰面积百分比＞20％，其差值＜20％；峰-3单峰面积占总峰面积百分比＞10％，而＜20％，其差值＜25％；其余单峰面积比均＜10％，峰面积比值不做要求。符合指纹图谱的要求。 　　3.3 非共有峰面积通过10批药材供试品的测定，统计非共有峰与总峰面积的百分比，其结果为非共有峰面积百分比7.07％，符合指纹图谱研究的＜10％的检测要求。 　　3.4 相似度采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）》对各样品色谱图的原始文件（输出格式为aia）进行分析，自动匹配并以10批样品生成的对照谱图（中位数法）作为对照模版， 计算 各色谱图的整体相似度介于0.564～0.887之间。见表4。 　　表4 10批药材相似度（略） 　　3.5 其它药材和茅苍术HPLC-ELSD标准指纹图谱的比较在同样条件下分别测定了产于湖北和安徽的南苍术、北苍术、白术药材的色谱图，并与茅苍术HPLC-ELSD标准指纹图谱比较相似度。结果见表5。 　　图1 典型茅苍术HPLC-ELSD色谱图（略） 　　 　　 4 讨论 　　苍术为中医常用药，临床应用 历史 悠久，具有健脾燥湿、祛风散寒的功效，尤以产于江苏茅山地区的茅苍术品质最好，历来认为茅山是茅苍术的道地产区。对茅苍术道地性的研究集中在对其挥发油的研究。大量实验证明道地产区与非道地产区茅苍术含油量有显著性差异，且道地产区低于非道地产区，这提示我们茅苍术的道地性可能不是体现在挥发油上，而是在水溶性成分中。日本学者在对茅苍术的研究中，从其水溶性部分分得了大量的单萜苷类成分，且显示具有较好的药理活性。基于这种原因，我们对茅苍术的水溶性化学成分进行了系统的化学分离，并对其指纹图谱进行研究。实验发现，苍术水溶性部分成分多为没有紫外吸收的单萜苷类成分，采用紫外检测器在图谱中基本看不到吸收峰，故本实验选用ELSD检测器并获得了满意的结果。 　　表5 与其它药材的比较结果（略） 　　4.1 提取条件摸索 比较了甲醇、95％乙醇、50％甲醇、50％乙醇等对样品的提取效果，以甲醇提取的样品液出峰较多，故选定甲醇做为提取溶剂。 　　4.2 液相条件摸索 本实验采用ELSD检测方式，ELSD检测器能检测到任何挥发性低于流动相的化合物，因此溶剂中极微量的残留成分也能检测出来，造成峰的干扰或基线不稳。在液相洗脱条件的摸索中，尝试了使用甲醇－水，乙腈－水两种溶剂系统。即使在使用高纯度甲醇溶剂时，谱图中仍有含量较大的杂峰，而在选用乙腈时杂峰较少，故选择乙腈－水做为梯度洗脱的溶剂系统。茅苍术所含成分较复杂，给液相分离带来了很大的困难，通过加入一定的缓冲溶液可以大大的改善峰形，提高分离度。对几种挥发性的缓冲溶液进行比较，选定加入0.25%的乙酸。 　　所采集的10批药材均为野生茅苍术药材，生长年限等因素可能会对药材的内在质量产生一定的影响，所研究的指纹图谱