茯苓的摇瓶补料发酵和发酵罐补料液体发酵.docVIP

　　茯苓的摇瓶补料发酵和发酵罐补料液体发酵 【摘要】 　　本文在茯苓摇瓶液体发酵条件 研究 的基础上，进一步探讨了茯苓的摇瓶补料培养液体发酵和发酵罐补料液体发酵的发酵工艺。新发酵工艺缩短了茯苓液体发酵的时间，并提高了茯苓菌体产量。 【关键词】 茯苓；液体发酵；发酵条件；补料；发酵罐 　　Erlenmeyer Flask Additional Medium Liquid Fermentation and Additional Medium Liquid Fermentation in Fermentor of Poria Cocos Abstract:Under the studies on conditions of liquid fermentation of Poria cocos,the techniques of Erlenmeyer flask additional medium liquid fermentation and additional medium liquid fermentation in fermentor e of Poria cocos liquid fermentation ycelium entation. Key entation;fermentation conditions;additional medium;fermentor 茯苓来源于多孔菌科真菌茯苓［Poria cocos (Sch2，121.3℃灭菌20 min。 1.3.2 摇瓶发酵培养基 葡萄糖20g，酵母浸膏3.5g，蛋白胨4.5g，K2HPO4 1g，MgSO4.7H2O 0.5g，初始pH值5.5，蒸馏水1L。1.05 kg/cm2，121.3℃灭菌20 min。 1.3.3 摇瓶补料培养基 葡萄糖20g，蒸馏水100ml。0.56kg/cm2，112.6℃灭菌30 min。 1.3.4 发酵罐发酵培养基 葡萄糖100g，酵母浸膏17.5g，蛋白胨22.5g，K2HPO4 5g，MgSO4.7H2O 2.5g，初始pH值5.5，蒸馏水4.05L。1.05 kg/cm2，121.3℃灭菌20 min。 1.3.5 发酵罐补料培养基 葡萄糖100g，蒸馏水600mL。0.56kg/cm2，112.6℃灭菌30 min。 2 方法 2.1 茯苓摇瓶液体发酵菌种的制备 在250ml三角瓶中装入50ml液体种子培养基，按0.5％的比例接种冷冻甘油菌，25℃摇瓶振荡培养2d作为液体菌种备用。 2.2 茯苓摇瓶补料液体发酵 在2L三角瓶装入360ml液体摇瓶发酵培养基，以7％的比例接种液体菌种，培养温度为26℃，培养基初始pH值为5.5，摇瓶转速为150r/min的培养条件下进行摇瓶培养，摇瓶培养时间为7d。在葡萄糖总浓度为4％的条件下，在茯苓液体发酵的不同培养时间，分别以1%葡萄糖浓度（20ml补料培养基）分两次补糖或以2%葡萄糖浓度（40ml补料培养基）一次补糖。 2.3 茯苓发酵罐液体发酵菌种的制备 在1L三角瓶中装入350mL液体种子培养基，按0.5％的比例接种冷冻甘油菌，25℃摇瓶振荡培养2d作为液体菌种备用。 2.4 茯苓发酵罐补料液体发酵 在火焰保护下，将350ml发酵罐种子液接种到发酵罐内。将发酵温度设定为26℃，pH值设定为5.5，搅拌转速和通气量根据溶氧水平的高低而调整。在葡萄糖总浓度为4％的条件下，在茯苓液体发酵第48、60、72和84h时，由蠕动泵分四次将0.33%的葡萄糖浓度（100ml补料培养基）或0.67％的葡萄糖浓度（200ml补料培养基）的补料培养基滴加入发酵罐培养液体内。同时，分别考察了不同补料条件下茯苓发酵罐液体发酵的最佳发酵终点。 2.5 菌丝称重 发酵液6 000r/min离心15min，收集沉积的菌丝球60℃烘干至恒重，用精密天平称重。 3 结果与讨论 3.1 茯苓摇瓶补料液体发酵 以初始葡萄糖浓度为4％，不补糖发酵为对照。以初始葡萄糖浓度为2％， 研究 在不同时间补糖和以不同方式补糖对茯苓发酵水平的 影响 。从实验结果可知（见表1），在发酵培养第60h和第72h，分别以1%的葡萄糖浓度补糖效果最佳。表1 不同时间和不同补料方式对茯苓的摇瓶补料发酵的影响 3.2 茯苓摇瓶补料发酵讨论 碳源浓度对茯苓液体发酵的影响较大。初始糖浓度对发酵有一定的影响，糖浓度过高，将抑制茯苓的生长，但糖浓度过低，由于碳源供应不足，也将使茯苓生长受到抑制。茯苓进入对数生长期后，适当补糖可提高茯苓发酵产量。 在不同的培养时间补糖对茯苓生长有一定的影响，补料时间太早，碳源未很好地消耗而不利于茯苓的生长；而补料时间太晚，则又未能及时满