莽草酸对子囊霉素生物合成的影响.docVIP

　　莽草酸对子囊霉素生物合成的影响 作者：穆云龙 余旭亚 孟庆雄 王洪钟 【摘要】 研究了添加莽草酸前体物质对子囊霉素生物合成的影响。结果表明，发酵培养24h时添加0.15%的莽草酸，至96h发酵结束时子囊霉素发酵效价最高，可达131.7mg/L；与不添加前体物质相比，子囊霉素发酵效价提高了51%。 【关键词】 子囊霉素； 生物合成； 莽草酸； 前体 子囊霉素(asycin)又叫FR900520，FK520，为23碳的大环内酯类化合物，是免疫抑制剂FK506(他克莫司，tacrolimus)的乙基类似物，40多年前从含有吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的土壤中分离得到。以往只知道它具有抗真菌和抗生素活性，直到发现了类似物他克莫司才进一步推动了对子囊霉素性质和生物活性的认识。现在研究发现子囊霉素具有很强的免疫抑制剂作用，可用于 治疗 自身免疫疾病和皮肤疾病，在预防器官移植排斥方面也很有效。虽然子囊霉素在免疫抑制剂方面的应用显示了良好的前景，但限制它使用的一个主要原因是产率低，成本过高，因此提高子囊霉素的发酵水平，以降低生产成本具有重要的意义。 不同大环内酯类抗生素的生物合成大都是在起始单位上添加C2、C3、C4延伸单位，以及β碳原子的变化。721，本实验室保存。 1.2 培养基［5］ 斜面培养基(%) 葡萄糖1，牛肉膏0.4，蛋白胨0.4，酵母膏0.1，NaCl 0.25，琼脂2，pH7.0。 种子培养基(%) 淀粉2.5，葡萄糖2，黄豆粉1.5，蛋白胨0.5，酵母粉0.5，硝酸钾0.25，NaCl 0.2，碳酸钙0.2，pH7.0。 发酵培养基(%) 淀粉3.5，黄豆粉3，甘油1，豆蛋白胨1，磷酸二氢钾0.08，碳酸钙0.4，pH7.0。 1.3 培养条件［6，7］ 斜面培养 28℃，培养10～15d。 种子培养 28℃，新鲜斜面挖块接入种子瓶，装液40m1/250m1，摇床转速220r/min，培养40～60h。 摇瓶发酵培养 28℃，10%种子液接种入发酵瓶中，装液100m1/500m1，摇床转速220r/min，培养96h。 分离平板培养 与斜面培养条件相同，培养时间依菌落生长情况而定。 1.4 检测方法 按 2.2 莽草酸浓度的选择 确定莽草酸前体对子囊霉素的发酵有较显著的提高作用后，分别向发酵培养基中添加0.05%、0.1%、0.15%、0.2%和0.5%的莽草酸，发酵96h后取样测定子囊霉素产量。 结果当发酵培养基中莽草酸含量由0增加到0.15%时，子囊霉素产量持续上升；但当莽草酸浓度超过0.15%时，子囊霉素的产量明显降低。这可能是由于莽草酸浓度过高，引起培养基pH的变化，抑制菌丝生长，影响子囊霉素合成；也可能是由于高浓度的莽草酸对子囊霉素的合成有抑制作用，导致子囊霉素产量降低。因此，确定前体莽草酸的加量为0.15%，此时子囊霉素的产量为118.6mg/L，较对照组提高了36%。 2.3 莽草酸添加时间的选择 在摇瓶发酵培养的0、24、36、48和60h时向发酵培养基中加入0.15%的莽草酸前体，发酵96h后测定子囊霉素产量。 结果24h加入莽草酸前体子囊霉素产量提高最大，其子囊霉素产量高达131.7mg/L，高于0h加入莽草酸的产量(118.6mg/L)，与不加前体时的产量(87.2mg/L)相比提高了51%。其原因可能因为0h加入的莽草酸部分合成芳香族氨基酸而被消耗掉，而24h加入的莽草酸大部分作为次级代谢的前体直接转化二羟基环己烷羧酸而参与子囊霉素的生物合成。而36h后添加莽草酸前体则产量明显降低，可能因为此时加入的莽草酸大部分还未来得及转化，发酵已经结束，莽草酸利用不充分。 3 讨论 orisaki M, Arai T. Identity of immunosuppressant FR900520 ar P, Shorma S K, Malriya H K, et al. An improved fermentation prosess for preparing asycin. asakuni O, Tanak H, et al. Method for inhibiting lymphokine production. US,6201005B1 ［P］.20010313 ［8］ 张育杰，胡海峰，朱宝泉. 前体对洛伐他汀生物合成的影响［J］. 中国 抗生素杂志，2006，31(9):529～531.