葡萄糖对L02细胞LXRα与ANGPTL3基因表达的影响.docVIP

　　葡萄糖对L02细胞LXRα与ANGPTL3基因表达的影响 作者：曾建涛，王继红，黄家利，程梅 【摘要】 目的： 研究 葡萄糖对L02细胞肝X受体(LXRα)与血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)基因表达的 影响 ，探讨LXRα在糖尿病和脂代谢联系中的作用. 方法 ： 用5.6, 7.0, 11.1, 28.0和33.0 mmol/L的葡萄糖培养L02细胞，5.6 mmol/L组作为对照组.用胆固醇酶联法测定各组细胞内胆固醇含量，采用RTPCR方法检测LXRα和ANGPTL3的mRNA表达量. 结果： 高浓度葡萄糖可促进L02细胞内胆固醇含量上调LXRα和ANGPTL3 mRNA表达，变化差异均有统计学意义(Plt;0.05). 结论： 高浓度葡萄糖增加ANGPTL3表达，可能是通过增加细胞内总胆固醇含量而激活LXRα，而LXRα的激活则引起ANGPTL3基因的高表达. 【关键词】 血管生成素样蛋白3；肝X受体α； 糖尿病 　　【Abstract】 AIM: To investigate the effects of glucose on expressions of LXRα and ANGPTL3 in L02 cell, and to explore the relation of LXRα ent of diabetes mellitus acpanied ia. METHODS: L02 cells ediums containing 5.6, 7.0, 11.1, 28.0 and 33.0 mmol/L glucose, among mol/L glucose group ed by cholesterol enzyme link assays. The LXRα and ANGPTL3 mRNA ined by reverse trancriptase polymerase chain reaction (RTPCR). RESULTS: The expression of LXRα and ANGPTL3 mRNA increased ay interfere ANGPTL3 mRNA through incresasing total cholesterol, activating LXRα. The activation of LXRα upregulates the expression of ANGPTL3. 　　【Keyellitus 　　0 引言 　　肝X受体（liver Xactivated receptor, LXRs）是核受体超家族的成员，包括两种同源亚型LXRα(NR1H3)和LXRβ（NR1H2）. LXRs作为甾醇类感受器调节一系列与脂质代谢相关基因的表达. 血管生成素样蛋白3（angiopoietinlike protein 3, ANGPTL3）是新的LXRs靶基因，在脂质代谢中有重要作用［1-2］. 本研究以人肝细胞株L02为研究对象，从细胞水平研究葡萄糖对LXRα和ANGPTL3基因表达的影响，探讨LXRα在糖尿病和脂代谢联系中的作用. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 人肝细胞株L02（重庆医科大学基础医学研究所）；RPMI 1640普通培养基（美国Gibco公司）；新生牛血清（杭州四季青公司）；RT试剂盒（日本Toyobo公司）；PCR试剂盒（广州东盛生物公司）；LXRα, ANGPTL3和βActin引物（上海生物工程公司合成）；胆固醇酶联试剂（浙江伊利康公司）；PCR仪,GelDoc 100凝胶成像仪（美国BioRad公司）. 　　 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞分组及培养 L02细胞以每孔3×105个细胞接种于培养板.在含100 mL/L新生牛血清的RPMI 1640培养液中培养36 h后，随机分为5组（G1～G5），分别在不同浓度葡萄糖的培养液中培养24 h. G1组为对照组. 　　1.2.2 胆固醇含量测定 5组L02细胞用RPMI 1640培养基培养24 h后，用PBS洗细胞2次，加细胞裂解液裂解细胞，30 min后再超声裂解4次，4℃ 12 000 g离心15 min. 用Log/g). 　　1.2.3 两种基因mRNA表达的检测 按试剂说明，常规方法提取细胞总RNA，检测总RNA的纯度和完整性. 用RTPCR方法检测各基因的mRNA表达量. LXRα上游引物：TCC CAC GGA TGC TAA TG，下游引物：TCC CAG GAA TGT TTG CC. ANGPTL3上游引物：TCC AGA ACA CCC AGA AGT AAC，下游引物：CCA GCC TCC TGA ATA ACC CT. βA