补肾中药对核受体共调节因子表达的影响.docVIP

　　补肾中药对核受体共调节因子表达的影响 作者：张磊 郑腾 杨民和 张志灯 蔡晶 【摘要】 目的 通过检测含药血清培养的人乳腺癌细胞中核受体共激活因子(steroid receptor coactivator1，SRC1)和核受体共抑制因子(nuclear receptor corepressor，NCOR)的mRNA表达，从分子水平上探讨补肾中药对核受体共调节因子表达的影响。方法 DAMB231，利用实时荧光定量RTPCR方法检测SRC1和NCOR的mRNA表达。结果 补肾阳中药淫羊藿雄性大鼠含药血清上调了SRC1的表达，对NCOR没有显著影响;而补肾阴中药女贞子下调了SRC1共激活因子的表达，上调了NCOR的表达。结论 补肾中药淫羊藿、女贞子对核受体共调节因子的表达有调节作用。 【关键词】 核受体共激活因子;核受体共抑制因子;淫羊藿;女贞子 　　【Abstract】 Objective To explore the effect of different tonifying kidney on expressions of steroid receptor coactivator1 (SRC1) and nuclear receptor repressor (NCOR) mRNA. Methods DAMB231) and the expressions of SRC1 and NCOR mRNA edicine epimedium could upregulate the expression of SRC1 in male rats and had no effect on the expression of NCOR. Tonifying kidney yin Chinese medicine fructus ligustri lucidi could doedicine epimedium and fructus ligustri lucidi has regulation effect on the expression of steroid receptor coregulator. 　　【Key edium; Fructus ligustri lucidi 　 核受体共调节因子是调节基因表达的一类蛋白，包括共激活因子和共抑制因子，它们通过在不同的条件下与核受体结合从而促进或者抑制核受体对基因转录的激活作用〔1〕。淫羊藿和女贞子都属于补肾类中药。淫羊藿增强性腺功能、调节机体免疫功能、促进骨生长、 延缓衰老，是一类补肾阳、强筋骨的中药〔2〕。女贞子可以 治疗 阴虚内热、头晕、目花、耳鸣、腰膝酸软、须发早白等，有补肝肾、强腰膝、清热、明目的功能〔3〕。共调节因子与核受体相互作用，对人的生殖生理、生长发育以及新陈代谢都有重要的调节作用〔1〕。淫羊藿、女贞子有类似于激素的效应〔4〕。激素发挥作用除了需要激素受体介导外，还需要共调节因子的协助，那么，淫羊藿、女贞子是否能通过影响共调节因子的表达而发挥作用呢?本实验中，我们通过检测淫羊藿和女贞子含药血清培养的雌激素受体缺失的人乳腺癌细胞MDAMB231中核受体共激活因子(SRC1)和核受体共抑制因子(NCOR)的mRNA相对表达水平，进一步探讨淫羊藿和女贞子药效作用的机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 24只3月龄SPF级ikro 22 R;凝胶成像系统Kodak公司，型号GL 200;梯度PCR仪Biometry公司，型号96 T;显微镜Olympus公司，型号CX40RF200;实时荧光定量PCR仪MJ Research公司，型号DNA Engine option2。 　　1.4 方法 　　1.4.1 大鼠给药 大鼠分为3个大组，每个大组又分为雌雄两个小组，每小组4只，分好组的大鼠在南京军区福州总 医院 由专业人员饲养，并且每天灌胃1次，连续灌胃14 d。3个大组依次给予淫羊藿、女贞子两种药液和蒸馏水灌胃。 　　1.4.2 含药血清制备 采用腹主动脉采血法采取灌胃14 d的大鼠血液。待血液凝固后，3 000 r/min离心5 min，取上层淡黄色液体，即为含药血清。0.22 μm的滤膜过滤除菌，-70℃冰箱冻存备用。 　　1.4.3 SRC1、NCOR基因表达量的检测 选用雌激素受体阴性且分裂快的人乳腺癌细胞MDAMB231作为实验细胞。Gibco公司的L15培养基加10%胎牛血清在37℃无CO2条件下培养。细胞48 h传代1次。将传代后的细胞培养24 h后，用5%胎牛血清+10%含药血清的L15培养基培养48 h，提取细胞总RNA，按照总RNA提取试剂盒说明书操作。采用两步RTPCR