实验七薄层色谱及天然色素的提取.docVIP

实验五 薄层色谱和天然色素的提取（7学时） 一、实验目的 1．了解薄层色谱的一般原理和意义，学习薄层色谱的操作方法。 2．掌握液体有机化合物的干燥。 3．掌握天然色素的提取方法。 二、实验原理 绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。其结构如下： 叶绿素中a的含量通常是b的3倍。尽管叶绿素分子含有一个极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。 胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，它有三种异构体，即α或-、β-和γ-异构体，其中β-异构体含量最多，也最重要。生长期较长的绿色植物中，异构体β-体的含量多达90%。β-体具有维生素A的生理活性，其结构是两分子维生素A在链端失去两分子水结合而成的。在生物体内，β-体受酶催化即形成维生素A。目前β-体已可进行工业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。 叶黄素是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。故本实验采用甲醇——石油醚的混合溶剂提取以上三种色素。 薄层色谱又称为薄层层析,属于固-液吸附色谱。其基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。 当流动相展开剂带着混合物组分以不同的速率沿板移动，即组分被吸附不断地吸附被流动相不断地溶解解吸而向前移动。由于吸附对不同组分有不同的吸附能力流动相有不同的解吸能力。因此在流动相向前移动过程中不同的组分移动不同的距离而形成了互相分离的斑点。在给条件下吸附剂展开的选择薄厚度及均匀度等化合物的距离与展开前沿移动的距离之比值值是给特有的常数。即 影响Rf值的因素很多，如样品的结构、吸附剂和展开剂的性质、温度以及薄层板的质量等。当这些条件都固定时，化合物的比移值Rf是一个特性常数。但由于实验条件容易改变而不易固定，因此在鉴定一个具体化合物时，经常采用与已知标准样品对照的方法。 利用薄层色谱进行分离及工作在灵敏快连、准确方面比纸色谱优越。薄层谱的特点是：1）设备简单操作容易分离时间短需数分钟到几小时即得到结果因而常用来跟踪有机反应测机反应完成的程度分离能小虽，斑点集中，特别适用于挥发性小，或在高温下易发生变化而不能用气相色谱分离的物质；可采用腐蚀性的显色剂如浓硫酸，且可在较高温度下显；不仅适用于小量样品几毫克的分离，也适用于较大量样品的精制可达500毫克。应指出，薄层色谱是成功，与样品、使用的吸附剂、展开剂以及薄层的厚度等因素有关。剪刀研钵、布氏漏斗、圆底烧瓶、直形冷凝管、层析缸玻棒载玻片(2.5 cm×7.5 cm，6块)硅胶G，羧甲基纤维素钠、中性氧化铝(150～160目)、甲醇、95%乙醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、菠菜叶。 名 称 分子量 性状 折光率 比 重 熔点℃ 沸点℃ 溶解度：克/100ml溶剂 水 醇 醚 乙醇 46.07 liq 1.3600 0.7893 -144 78 ∞ ∞ ∞ 丙酮 58.07 liq 1.3588 0.7899 -94 56.2 ∞ ∞ ∞ 1．薄层色谱 （1）吸附剂与展开剂： 吸附剂（固定相）：用于与样品发生吸附作用的固定不动的物质。在混合物样品流经吸附剂（固定相）的过程中，由于各组分与吸附剂（固定相）吸附力的不同，就产生了速度的差异，从而将混合物中的各组分分开。一般常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。硅胶可分为硅胶H（不含黏合剂）、硅胶G（含黏合剂）和硅胶HF（含荧光物质，可在紫外光下观察）等。氧化铝同样也可分为以上几种类型。 展开剂（流动相）：也称洗脱剂，在色谱过程中起到将吸附在固定相上的样品洗脱的作用。 选择展开剂时应考虑样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素。展开剂的极性越大，对化合物的解吸附（洗脱）能力就越大，即Rf值就越大。如选用一种溶剂（展开剂）后发现其样品成分的Rf值都比较大，则可换用一种极性较小的展开剂，也可在原展开剂中加入一种极性较小的溶剂。展开剂的洗脱能力按下列次序递增：已烷，四氯化碳，甲苯，苯，二氯甲烷，氯仿，乙醚，乙酸乙酯，丙酮，丙醇，乙醇，甲醇，水。 （2）薄层色谱的操作步骤 薄层色谱是通过制浆、涂片、点样、展开及显色来完成的。 ①制浆 浆液的制备可分为干法和湿法。干法是将选好的硅胶G慢慢倒入溶剂中调成糊状备用。湿法是将水和硅胶G按1：4的比例在搅拌下将硅胶G慢慢地倒入水中调成糊状，不要反过来加，防止形成团块。湿法制浆要在使用前调制，否则浆料容易凝固结块。 ②涂片 大量使用可用涂布器涂布。简单的涂布方法是将两片载玻片用肥皂水和水洗涤干净，再用碎滤纸吸干玻片上的水分，然后将其重叠在一起，用手