谷氨酸铬对四氧嘧啶性糖尿病小鼠胰岛及B细胞形态结构的影响.docVIP

　　谷氨酸铬对四氧嘧啶性糖尿病小鼠胰岛及B细胞形态结构的影响 【摘要】 ［目的］探讨谷氨酸铬对糖尿病小鼠胰岛及B细胞的 影响 .［ 方法 ］用四氧嘧啶制作糖尿病小鼠模型，随机分为糖尿病对照组、实验Ⅰ组（每日灌胃给予谷氨酸铬250μg/kg）及实验Ⅱ组（每日灌胃给予谷氨酸铬125μg/kg），另设正常对照组.实验周期为3周，利用免疫组织化学方法观察胰岛及B细胞的组织学变化.［结果］实验Ⅰ组小鼠胰岛内空虚部分明显缩小，B细胞及其颗粒增多，界限较清楚.［结论］谷氨酸铬对四氧嘧啶所致小鼠胰岛及B细胞的损伤具有明显的改善作用. 【关键词】 糖尿病；谷氨酸铬；胰岛素分泌细胞;小鼠 ABSTRACT:OBJECTIVETo observe the effects of chromium glutamate (CG) on pancreas islet and B cell in diabetic mice.METHODS The diabetic model of mice ice al control group, model control group, experimental groupⅠand Ⅱby intragastric administration munohistochemical method after 3 ent.RESULTSThe void part in islets in groupⅠargin prove the injury of islet and B cell in experimental diabetic mice. Key ellitus;chromium glutamate;insulinsecreting cells;mice 糖尿病是常见的内分泌代谢障碍性疾病，糖尿病患者体内微量元素铬常处于缺乏状态［1，2］.铬为人体必需微量元素，而Cr3+是胰岛素的协同元素，协同胰岛素发挥生理功能，促进糖及脂代谢.因此在糖尿病 治疗 中除饮食疗法、胰岛素及其他降糖药物之外，微量元素的治疗亦不可缺少.本实验 应用 免疫组织化学方法，观察了谷氨酸铬对实验性糖尿病小鼠胰岛及B细胞形态学变化的影响. 1 材料与方法 1.1 材料 实验动物取成年昆明种雄性小鼠，体重为（20±2）g，由延边大学医学部实验动物科提供.药品与试剂：谷氨酸铬由南昌大学化学系李新生教授提供；四氧嘧啶为香港FARCO化学产品公司产品，批号为420113E；兔抗小鼠胰岛素免疫组织化学染色试剂盒为天津市灏洋生物制品 科技 有限公司产品.主要仪器有德国LEica 820型组织切片机及日本OLYMPUS VANOX型万能显微镜. 1.2 方法 1.2.1 四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型的制作 取实验用成年雄性昆明种小鼠,适应性喂养1周，禁食24h，自由饮水.用生理盐水将四氧嘧啶配制成7g/L注射液，以70mg/kg的剂量给每只小鼠尾静脉行一次性注射.注射后第5日检测小鼠空腹血糖，将空腹血糖值大于10.00mmol/L者纳入糖尿病模型组［3，4］. 1.2.2 动物分组及处理 取糖尿病小鼠30只，按血糖高低随机分为3个组，即糖尿病对照组、实验Ⅰ组及实验Ⅱ组，每组各为10只，另取10只正常小鼠设为正常对照组.实验期间各组小鼠均给予块料饲养，实验Ⅰ组小鼠每日给予谷氨酸铬250μg /kg，实验Ⅱ组小鼠给予谷氨酸铬125μg /kg，糖尿病对照组和正常对照组给予相应体积的蒸馏水，均灌胃给予，实验周期为3周. 1.2.3 免疫组织化学观察 实验结束后将小鼠脱颈处死，迅速剖取胰尾，在Bouin氏液中固定12h，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，制作成5μm切片，行免疫组织化学染色显示胰岛及胰岛B细胞.免疫组织化学染色采用高敏链霉亲和素（SABC）法，具体步骤如下：切片脱蜡至水后在微波炉中行抗原修复，用30g/L过氧化氢孵育30min,以消除内源性过氧化物酶活性，PBS洗涤3次，每次5min；滴加封闭用血清工作液，置于37℃湿盒孵育30min，滴加胰岛素抗体，置于4℃湿盒孵育24h，PBS洗涤3次，每次5min，滴加生物素化的二抗，置于37℃湿盒孵育30min，PBS洗涤3次，每次5min，滴加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素工作液，置于37℃湿盒孵育30min，PBS洗3次，每次5min，DAB显色，脱水，透明，封片，观察；对照实验：以正常兔血清替代胰岛素抗体进行.用OLYMPUS万能显微镜观察染色后标本并拍片. 2 结果 应用 SABC法染色后，胰岛B细胞分泌的胰岛素与胰岛素特异性抗体结合，呈棕黄色颗粒.正常对照组小鼠胰岛多为圆形及椭圆形，大小不一，形态完整，胰岛B细胞占胰岛绝大部分，位于胰岛中央，呈免疫反应