谷胱甘肽与顺铂合用对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响.docVIP

　　谷胱甘肽与顺铂合用对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响 作者：徐艳岩 安郁宽 李波清 李京敏 【摘要】 目的 探讨谷胱甘肽 (GSH) 与顺铂 (CDDP) 联合应用对人肝癌细胞HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法 应用酸性磷酸酶法 (APA) 检测细胞生长抑制率;用倒置显微镜观察经CDDP、GSH处理后的细胞形态学改变;采用流式细胞术研究GSH与CDDP合用对细胞周期的影响;AnnexinVFITC/PI双染检测细胞凋亡率;罗丹明123染色检测线粒体膜电位 (Δψm) 变化。结果 GSH与CDDP联合应用可以明显抑制HepG2细胞增殖，癌细胞出现凋亡形态变化，其作用明显高于GSH组与对照组细胞，且不低于CDDP单独给药组;GSH与CDDP联合应用引起Δψm更明显地下降。结论 GSH与CDDP联合用药不降低CDDP对肝癌细胞的作用，其诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用可能是通过线粒体通路实现的。 【关键词】 谷胱甘肽;顺铂;肝癌细胞;凋亡;细胞周期 　　【Abstract】 Objective To explore the effect of glutathione (GSH) bined ine the inhibition rate of cells. Inverted microscope orphological changes of cells after CDDP and GSH treatment. Floetry itochondrial membrane potential (Δψm) eans of Rhodamine123. Results GSH bined oreover, ore obvious decline of Δψm than CDDP. Conclusions GSH bined itochondia pathportant role in inducing apoptosis of HepG2. 　　【Key a; Apoptosis; Cell cycle 　　顺铂(CDDP) 是目前临床上应用较广泛的一种高效抗癌药物，但因其有肝、肾、神经等毒性而使其应用受到限制。有关 　　2.4 GSH与CDDP单独及联合使用对HepG2细胞凋亡率的影响 对照组细胞培养24、48 h后细胞凋亡率分别为 (5.56±1.41)%，(9.96±2.16)%;CDDP组与GSH+CDDP组处理细胞24 h后细胞凋亡率分别为 (11.01±3.66)%，(9.37±6.52)%;作用48 h后细胞凋亡率分别为 (55.89±4.35)%，(55.98±4.26)%，两加药组与对照组相比较差异均有统计学意义(Plt;0.01); GSH+CDDP组与CDDP组比较差异无统计意义(Pgt;0.05)。 　　2.5 GSH与CDDP单独及联合使用对HepG2细胞线粒体膜电位的影响 GSH与CDDP联合作用于HepG2细胞24、48 h后，联合用药组弱荧光部分细胞百分比增高，线粒体与罗丹明123结合能力下降，与对照组和CDDP组比较，差异有统计学意义(Plt;0.01)，见表3。表3 各组HepG2细胞线粒体跨膜电位检测 　 　3 讨 论 　　CDDP是目前临床上常用的广谱抗癌药物，可与癌细胞DNA链上的碱基结合，干扰DNA复制和RNA转录，从而抑制癌细胞分裂，但因其毒副作用大而使其使用受到限制。普通的临床剂量就可造成肾损害，高剂量时也可造成肝毒性〔9〕。 　　GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽，是人体细胞内的重要代谢物质，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，能够清除体内的超氧离子及其他自由基，保护细胞膜的完整性，维持细胞的正常代谢。研究发现，作为抗肿瘤 治疗 的辅助用药，GSH对化疗药物所导致肝损害有较好的预防作用及治疗效果〔10〕。 　　本实验认为GSH并未明显影响CDDP的细胞毒性。已有资料表明，CDDP造成脏器损伤的主要原因为自由基损伤，GSH最重要的作用就是抗氧化作用。GSH在抗自由基保护脏器的同时，并未影响到铂的代谢和蓄积〔11，12〕。 　　Annexin是一种分子量为35～36 kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(PS) 高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin作为荧光探针，利用流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。PI是一种可以与DNA和RNA特异性接合的核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染，将二者匹配使用，可以将活细胞、凋亡早期细胞、凋亡中晚期细胞和坏死细胞区分开来。由流式细胞仪检测结果得知，随着作用时间的延长，GSH明显降低了细胞的凋亡率，但给予CDDP