中药苦参碱对体外培养人宫颈癌Hela细胞的抑制作用.docVIP

　　中药苦参碱对体外培养人宫颈癌Hela细胞的抑制作用 作者：金畅，滕小玲，雷亚宁，周颖，郑膺，张婵 【摘要】 目的:探讨中药苦参碱对体外培养的人宫颈癌细胞株Hela细胞的抑制作用。 方法 :选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养，以0.125～2.0 mg/ml的苦参碱分别处理Hela细胞24～72 h后，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率，透射电镜进行形态学观察，RT-PCR半定量检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果:苦参碱对Hela细胞有抑制作用，呈剂量和时间依赖性, 其24 h半数抑制浓度（IC 50）为1.074 mg/ml；流式细胞仪检测到细胞在苦参碱作用后，细胞凋亡率增加；透射电镜观察发现部分细胞发生凋亡早期改变；RT-PCR结果显示凋亡相关基因Bcl-2/Bax比值随药物剂量增加而逐渐减少。结论:苦参碱对人宫颈癌Hela细胞具有明显抑制作用，诱导细胞凋亡可能是其机制之一。 【关键词】 苦参碱；宫颈癌；凋亡 Abstract: Objective:To explore the inhibitory effect of matrine on human cervical carcinoma Hela cells in vitro. Methods: The Hela cells g/ml) of matrine solution for 24～72 hours. MTT assay ed to evaluate the cytotoxin effect of matrine on Hela cells. FCM ission Electron Microscope analyses ine the cell morphology. Semiquantitative RT-PCR RNA levels of Bcl-2 and Bax gene expressions. Results: Different concentrations of matrines e-dependent and dose-dependent manner. The FCM analysis shoatrine. Partial cells presented characteristic morphological changes under the transmission electron microscope. The results of RT-PCR shoatrine concentration increased. Conclusion: Matrine can inhibit the proliferation of human cervical carcinoma Hela cells in vitro. Inducing apoptosis may be one of the mechanisms. Key atrine; cervical carcinoma; apoptosis 苦参碱是从中药苦参（sophora flavescent ait）的干燥根中提取的具有广泛药理作用的活性物质， 现代 医学 研究 表明苦参碱具有抗病毒、抗感染、平喘、增强机体免疫力、升高白细胞、保肝等作用。最近研究表明,苦参碱在体外培养的肝癌、肺癌和白血病中有明显的抗肿瘤作用，且没有化疗药物的毒副作用[1-4]。因此，苦参碱的抗肿瘤作用引起广泛关注，成为研究的热点。但 目前 苦参碱对宫颈癌抑制作用方面的研究报道较少。本研究选择人宫颈癌Hela细胞，初步探讨苦参碱对体外培养的Hela细胞的抑制作用。 1 材料和方法 1.1 材料 宫颈癌细胞株Hela细胞由温州医学院第一附属 医院 科研中心惠赠。胎牛血清、DMEM培养基为Gibco公司产品。四甲基偶氮唑盐（MTT）、二甲基亚枫（DMSO）为美国Sigma公司产品。苦参碱（斯巴特康）注射液为广州明兴药业有限公司产品（批号：060904-2）。Trizol为Invitrogen公司产品。M-MLV逆转录酶和Taq聚合酶及PCR常规试剂为日本Takara公司产品。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养：将冻存的宫颈癌Hela细胞37 ℃快速融解，常规复苏和传代。放在含10%胎牛血清的DMEM培养液，37 ℃，5%CO2培养箱内培养。细胞贴壁80%时传代，1周大约2次。 1.2.2 细胞增殖的测定（MTT法）：取对数生长期Hela细胞，以1×104个/孔加入96孔培养皿，过夜贴皿后，加入不同浓度的苦参碱，分别为0.125 mg/ml、0.25 mg/ml、0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml，每个浓度设5个复孔，