冠心病患者循环中EPCs与VEGF的关系及临床意义.docVIP

　　冠心病患者循环中EPCs与VEGF的关系及临床意义 作者：王进，郑奇军，彭阳红，刘维永 【摘要】 　　目的: 研究 冠心病患者循环中血管内皮生长因子（VEGF）与内皮祖细胞(EPCs)的关系及临床意义. 方法 : 55例入选者均经冠状动脉造影根据有无冠状动脉狭窄而分为两组：冠心病组30例，对照组25例. 采集入选者外周血，体外培养扩增内皮祖细胞，7 d后通过倒置相差显微镜计数内皮祖细胞克隆形成单位（EPC-CFU）评估外周血EPC水平，同时用ELISA法检测血浆中VEGF水平， 分析 冠脉组病人VEGF与EPCs的关系. 结果: 冠心病组VEGF水平低于对照组［（19.6±6.9 ）pg/mL vs （35.4±9.4）pg/mL,Plt;0.001）］；冠心病组血循环中EPC-CFU数量也较对照组降低（12.4±4.2 vs 19.0±5.1,Plt;0.001）；血循环EPCs数量与VEGF浓度成正相关（r=0.493，Plt; 0.01）. 结论: VEGF的下降可能是导致血循环中EPCS的减少的原因，可能参与了冠心病的发生和 发展 . 【关键词】 冠状动脉疾病 内皮祖细胞 血管内皮生长因子类 　　【Abstract】AIM: To investigate the correlation betal coronary arteries. After 7 days of culture，the number of EPCs colony-forming units(EPC-CFU) icroscope. The plasma level of vascular endothelial groined by ELISA. Relation betber of EPCs L vs (34.2±4.6)pg/mL,Plt;0.001］. The number of EPC-CFU in CAD group a level of VEGF and the number of EPC-CFU(r=0.493，Plt;0.01) ay induce the decrease of circulating EPC and be involved in the occurrence and development of coronary heart diseases. 　　【Keyo内服用过他汀类药物治疗的患者等. 　　1.2 方法 　　1.2.1 EPC的分离、培养和鉴定 外周血单个核细胞用淋巴细胞分离液（1.077，上海试剂二厂）通过密度梯度离心的方法获得. 离心洗涤后将单个核细胞重悬于含200 mL/L胎牛血清的M199培养基（Sigma公司），然后以5×106/孔的密度在fibronectin（sigma公司）包被的6孔板上培养，培养48h后，将未粘附的细胞吸出来计数后重悬于添加了200 mL/L胎牛血清（Hyclone公司），VEGF，bFGF,IGF-1，EGF（均来自Peprotec公司）的M199培养液中，然后以1×106/孔置于fibronectin包被的24孔板内. 在培养的第5天换液，于第7 d在倒置相差显微镜下随机选取3个视野，分别计数内皮祖细胞克隆形成单位（EPC-CFU）数目，取平均值. 实验者和另外一个专业的实验室技师双盲计数，评价重复性，变异系数lt;10%. 　　1.2.2 免疫荧光鉴定 培养细胞至第7日，细胞与10 μg/mL的DiI-acLDL，37℃孵育4 h，检测EPCs对DiI-acLDL的摄取，然后用2％多聚甲醛固定细胞10 min，用PBS浸洗，将10 μg/mL的FITC-UEA-I加于上述标本，于37℃下孵育1 h，激光共聚焦显微镜(Olympus)鉴定FITC-UEA-I和DiI-acLDL双阳性细胞为正在分化的EPCs. 　　1.2.3 VEGF测定 抽取外周血，3 h内以2000 r/min离心10 min，分离血浆，用市售的ELISA试剂盒（RD systems，Germany）按说明测定VEGF的含量. 　　统计学处理: 计量数据以x±s表示，均数比较采用单因素方差分析,双变量相关性分析采用Pearson相关方法. 数据用SPSS 13.0统计软件包处理，Plt;0.05为差异有统计学意义. 　　2 结果 　　2.1 EPCs的培养和鉴定 内皮祖细胞克隆形成单位（EPC-CFU）为一个圆形的细胞团核心，外周有扁平、梭形、放射状细胞的细胞集落（图1）. 用DiI-acLDL及FITC-UEA-I对细胞染色后，通过荧光显微镜观察，发红色荧光的为DiI-acLDL阳性细胞，发绿色荧光的为FITC-UEA-I（lectin）阳性细胞，染色双阳性细胞为正在分化的