培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影响.docVIP

　　培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影响 【摘要】 　　目的研究MS培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响，筛选有利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的培养基配方。方法采用正交和单因素实验设计，以生长40 d的彭泽贝母愈伤组织的生长率和生物碱含量为指标，评价各因素对其影响的大小。结果各因素对彭泽贝母愈伤组织生长影响大小依次为Pgt;Cagt;Kgt;N,对生物碱积累影响大小依次为Kgt;Ngt;Cagt;P；培养基中NO3-N含量较高时，有利于生物碱的积累；微量元素缺乏时均有利于彭泽贝母愈伤组织的生长，缺Cu、缺I时不利于生物碱的积累。结论有利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的最佳组合分别为：N3P1K3Ca2、 N1P2K3Ca1；培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量存在一定影响。 【关键词】 彭泽贝母 愈伤组织 生长量 生物碱 　　Abstract：ObjectiveTo study the effect of large elements, trace elements of MS culture medium on the groonantha Migo callus ,and to select the culture medium ulation.MethodsS culture medium have effects on the groonantha Migo callus. 　　Key onantha Migo; Callus; Alkaloids ; Groonantha Migo主产于江西北部的彭泽、湖口、都昌、九江、瑞昌、修水等县，已被确定为国产贝母属植物在江西的新分布,彭泽贝母作川贝母使用已有多年的 历史 ， 现代 药 理学 研究表明，彭泽贝母的药理、药效接近甚至优于几种常用贝母。近年来，其需求量增大，人们过度采挖，导致其野生蕴藏量锐减，加上人工栽培条件严格，有性繁殖年限长，无性繁殖系数低，病虫害防治难等，不能满足人们长期用药的需求。随着近年来对植物生物化学研究的深入，利用植物细胞、组织或器官培养获得并优化药用植物次生代谢产物，以及最终利用遗传工程制取次生代谢产物以满足人类对药用植物的巨大需求，已成为当前药用植物生物技术领域的研究热点。大规模药用植物组织培养技术的成功，使药用植物组织细胞培养技术在中药领域得到了更深的研究和应用。本课题组研究了不同激素组合对彭泽贝母愈伤组织诱导的影响，并对其高产细胞做了筛选［1，2］。本文在此基础上研究了MS培养基中无机成分对其生长及生物碱含量的影响，为进一步 工业 化生产奠定基础。 　　 1 材料与仪器 　　1.1 材料为本实验室继代培养的疏松的彭泽贝母愈伤组织。 　　1.2 药品贝母素甲购自 中国 药品生物制品检定所，批号：110750-200607；氯仿、甲醇、氨水、溴甲酚绿、邻苯二甲酸氢钾等均为分析纯。 　　1.3 仪器UV7501紫外/可见分光光度计（无锡科达仪器厂）；SS为基本培养基，NAA 2.5 mg/L+6-BA1.0 mg/L+KT 0.5mg/L为激素组合置于温度（20±1）℃，光照强度为1 000-1 500lx，湿度为100%光照培养箱内培养。 　　2.2 生长量测定接种和取材前后均称量培养基的重量, 计算 接种量、收获量和增长率（每个处理3瓶）：接种量=接种后瓶重(g)-接种前瓶重(g)，收获量=收获前瓶重(g)-收获后瓶重(g)，生长率（%）=收获量(g)×100／接种量(g)。 　　2.3 对其生长及生物碱含量的影响以N，P，K，Ca为4个因素，MS培养基中原浓度、1/2浓度、1/4浓度3个水平，采用正交设计L9(34)进行实验（见表1），培养40 d后取出材料，测定生长率和生物碱含量。表1 N，P，K，Ca含量正交设计因素水平表（略） 　　2.4 NH4+-N与NO3-N对愈伤组织生长及生物碱含量的影响培养基中的氮源改用KNO3和NH4Cl，总N浓度不变，研究其不同比例对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响，处理见表2。表2 铵态N与硝态N对其生长及生物碱含量的影响（略） 　　2.5 微量元素缺乏对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响以MS培养基为对照，把彭泽贝母愈伤组织接种到分别不加Fe，Mn，B，Mo，Zn，I，Co，Cu的培养基上，培养40 d后，取出材料测定生长率和生物碱含量。 　　2.6 生物碱的提取与含量测定生物碱的提取与含量测定 参考 刘红宁［3］、上官一平［4］等的方法，并在此基础上做了改进。 　　2.6.1 试剂的配制pH 5.0邻苯二甲酸氢钾缓冲液：称取4 g邻苯二甲酸氢钾，加热溶解并定容至100 ml，用0.2 mol/L Na