外周血MSCs的分离培养及对GCSF的动员反应.docVIP

　　外周血MSCs的分离培养及对GCSF的动员反应 作者：邓均，邹仲敏，张春雷，王军平，艾国平，粟永萍 【摘要】 目的 建立多种种属外周血间充质干细胞（MSCs）的分离培养方法，探讨其对粒细胞集落刺激因子（GCSF）的动员反应。方法 用percoll（1.131 g/mL）分离多种种属外周血单个核细胞，进行贴壁培养MSCs。以GCSF作为动员剂，培养骨髓和外周血来源的MSCs，计数动员前后的成纤维细胞集落形成单位（CFUF）。结果 对多种种属进行外周血MSCs分离培养，成功率不同。在本实验条件下，可以稳定的直接分离培养出大鼠外周血的MSCs。GCSF动员后，骨髓来源MSCs的CFUF数量显著高于对照组（P＜0.01）；外周血来源MSCs的CFUF数量也显著高于对照组（P＜0.01），接近4倍。结论 不同种属外周血MSCs分离培养难易不同，其直接原因是生理条件下外周血中存在的MSCs量少导致的。GCSF可以有效地动员大鼠骨髓和外周血MSCs。 【关键词】 间充质干细胞；动员；粒细胞集落刺激因子；细胞培养 Abstract: Objective To establish the isolating cultural method of MSCs from some genus peripheral blood (PB), and explore the mobilization response of MSCs by GCSF. Methods MSCs from some genus PB L) and carried out adherent culture. MSCsderived bone marroobilization by GCSF. Results PB MSCs different genus. Under our experiment condition, rat’s PB MSCs could been isolated and cultured steadily. A significantly higher number of CFUF of BMderived MSCs and PBderived MSCs than that of control group after mobilization by GCSF（P＜0.01），almost 4fold increase. Conclusion PB MSCs different genus, it concerned all number of circulating MSCs in BP. derived MSCs, especially PBderived MSCs by CFUF assay. Keyesenchymal stem cell; mobilization; GCSF; cell culture 正常生理情况下，间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）大量存在于骨髓，循环血液中仅有少量。已有研究证实可从胎儿和新生儿血液中分离培养出循环MSCs［1］。但从成熟个体外周血中分离MSCs，因受实验人员、环境、方法等影响，有成功［2］也有失败的［3］。对不同种属动物(或人)的外周血MSCs进行分离培养，其结果也不一样。粒细胞集落刺激因子(granulocyte colonystimulating factor，GCSF)作为体内重要的调节因子，自GCSF分子克隆和基因合成成功以来，在临床上已广泛应用。而GCSF大量应用于白血病的临床 治疗 ，主要得益于其对造血干细胞的有效动员。那么除了动员造血干细胞外，GCSF能否动员骨髓细胞中的MSCs或其他干细胞，还存在着很大争议［4］。因此，本研究对不同种属的外周血MSCs进行分离培养，在本实验室条件下建立成熟的分离培养外周血MSCs的方法，并探讨GCSF能否有效动员外周血MSCs。 1 材料与方法 1.1 实验动物及主要试剂 2月龄的健康清洁SD大鼠，体重100～150 g，雌雄不拘。健康C57BL/6小鼠，雌雄不拘，SPF级，6周龄，体重20～25 g。健康日本大耳白兔。动物均由本校实验动物中心提供。MEM/F12培养基、胎牛血清（Gibco公司，美国），GCSF（齐鲁制药有限公司）。 1.2 外周血MSCs的直接分离和培养 1.2.1 实验标本 为了探讨在本实验条件下，能否直接从外周血中分离培养出MSCs，拟对小鼠、大鼠、兔、人的外周血进行MSCs分离培养。标本分别为：①C57BL/6小鼠4只；②SD大鼠4只；③日本大耳白兔外周血4份；④人(志愿者)外周血4份。小鼠和大鼠外周