早孕期绒毛短期培养后染色体制备方法的改进.docVIP

　　早孕期绒毛短期培养后染色体制备方法的改进 【摘要】 目的 在以往研究的基础上，改进早孕期绒毛短期培养后染色体制备的方法。方法 采用的培养液血清浓度为5%，绒毛细胞经过48 h培养，将酶解离细胞、低渗处理与高浓度秋水仙素处理简化为一步，使用冰醋酸分步解离。结果 染色体分散好，带型清晰。结论 该技术简单省时，易于操作，成功率较高，便于临床推广使用。 【关键词】 绒毛;染色体 　　Abstract: Objective A modified technique of chromosome preparation from short-term culture of villi edium serum concentration of 5%, to merge cell enzymolysis separation from the cytotrophoblastic layer, treatment ent into one step, i.e., step-by-step dissociation by glacial acetic acid. Results The chromosomes ple, time-saving and easy to operate, osome 　　Simoni等[1]于1983年首先报道了应用绒毛滋养层细胞直接制备染色体的技术，此方法成为产前诊断方法上的突破。然而，这种直接制片法普遍存在分裂相少、形态及带型不理想等缺点,因而在临床病理检查中难以开展。为此，我们开展了绒毛短期培养及制片方法的研究，取得良好效果，现报告如下。 　 　1 资料和方法 　　1.1 一般资料 2008年1月—2008年8月收集50例妊娠7～14周绒毛标本，包括10例早孕人工流产绒毛组织和40例经宫颈吸取停育胚胎的绒毛组织。每例取绒毛10～20 mg进行实验。 　　1.2 方法 ①无菌条件下,将取出的绒毛组织立即放入RPMI 1640+抗生素的培养液中漂洗,在倒置显微镜下去除蜕膜组织及血污后,投入装有5 ml培养液(RPMI 1640+胎牛血清+2 mmol/L谷氨酰胺+抗生素)的培养瓶中,37℃恒温箱培养48 h。胎牛血清有0、5%、10%、20%4个浓度。②将绒毛转入含下列成分(2.0 μg/ml秋水仙素+1∶1的0.4%枸橼酸钠-0.4%KCl+EDTA-胰蛋白酶液)的溶液中，37℃处理40 min，每隔10 min悬浮1次。③加入新配制甲醇冰醋酸(3∶1)固定液1 ml预固定2 min，轻轻混匀。④离心(1 000 r/min)10 min，弃去上清液，加入固定液5 ml，吹打混匀后置于室温下固定35 min。⑤吸去固定液，加入新配制的40%冰醋酸溶液0.2 ml混匀解离1 min，随后加入0.8 ml 60%冰醋酸混匀继续解离3 min，待绒毛周围出现浑浊。⑥加入甲醇3 ml混匀，轻轻吹打数分钟，挑出绒毛枝后离心。⑦弃去上清液，加入固定液0.5 ml滴冰片，置80℃烤箱2 h。⑧0.005%胰蛋白酶液处理6～8 min，Giemsa染色。 　 　2 结 果 　　不加血清组分裂相数目最多，但染色体形态不如加5%血清者，而血清浓度大于5%时，分裂相数目却有降低趋势，血清浓度为5%的时候染色体形态最佳。50例绒毛标本中46例获得分裂相，每片20～40个分裂相不等。染色体分散好，带型清晰(图1)。10例人工流产标本染色体核型：6例46，XX;4例46，XY。40例胚胎停育标本中4例未获得分裂相，在36例获得分裂相的标本中4例46，XX;6例46，XY;其余26例均是异常核型:6例69,XXX; 8例47,XX,+21;6例47,XX,+16;3例47,XX,+17;2例47,XX,+3;1例48,XY,+15，+22。 图1 用改进的绒毛短期培养法制备的染色体核型图 　 　3 讨 论 　　 自然 流产及胚胎停育绒毛组织由于受污染和标本不新鲜等原因的影响，难以分析染色体结果。我们认为挑选质地较好的绒毛很关键，一般选新鲜、短胖、粗壮型为佳。我们在绒毛染色体制备的直接法[2]和培养法[3-4]基础上进行了一些有益的探索。在传统的绒毛培养过程中，培养液中血清的浓度变化很大，一般为5%～20%，还有的不加血清。我们的实验发现血清浓度为5%的时候染色体形态最佳，和