哺乳动物胚胎切割技术研究及应用进展.docVIP

　　哺乳动物胚胎切割技术研究及应用进展 哺乳动物胚胎切割技术研究及应用进展 胚胎切割是哺乳动物胚胎工程的重要组成内容，是应用显微手术的方法，将一枚胚胎分割成二分、四分甚至八分胚，经体内或者体外培养，然后移植入受体中，获得同卵双生或同卵多生后代的技术。胚胎分割是扩大胚胎数量的有效方法，也是胚胎克隆技术的一种，其不仅增加了优秀个体数量，而且还可将同卵双生后代用于各种试验研究，能排除遗传特性差异所带来的影响，在科学研究和畜牧生产中具有重要的意义。 　　1 哺乳动物胚胎切割技术的研究进展 　　1901年Spemann首次将蛙的两个卵裂球分离开，人工产生了双胞胎。1970年Mullen等将小鼠2-细胞胚胎的两个卵裂球分开，经过体外培养后再移植给受体，产生了哺乳动物的首次人工双胞胎。1978 Moustafa等将小鼠桑椹胚一分为二，得到双胞胎。1979年Eineck-Tillmann等分别将绵羊2-细胞胚胎和桑椹胚一分为二，获得同卵双胞胚。80年代以来，哺乳动物胚胎分割技术飞速发展。.收集整理育。张涌等[6]（1989）对称分割山羊孵出增大胚泡，不装透明带移植其裸半胚，仍可继续发育形成正常胎儿，而且获得较高的同卵双生率。 　　3.4 植入半胚的数量 　　许多学者研究表明，移植1枚半胚妊娠率低于同时移植2枚半胚的妊娠率。Lambeth 等 （1983）对半牛胚移植研究表明，同等条件下，移植1枚或2枚半胚于受体牛的黄体侧子宫角后，妊娠率分别为 16.7%（1/6） 和62.5%（ 5/8），而且后者获3对同卵双生。Maurer等 （1988）将2枚绵羊半胚移植于受体羊黄体侧或双侧子宫角各1枚时，妊娠率分别为57.1%和20.0%。马保华等[8]（1995） 的实验也同样证明将2枚裸半胚同时移植于受体羊黄体侧子宫角后，获得了较好的结果。 3.5 半胚在体外停留时间 　　Bader（1985）研究证明鲜胚分割后用血清PBS液培养4h以上后妊娠率降低。陶涛等[13] （1991） 对奶牛胚胎分割实验发现 ，半胚在体外滞留时间超过4 h和受体的黄体发育不佳均显著降低半胚的受胎率。DearmasR（1986）报道在20% FCS- PBS液中培养2h的半胚，其存活力最高。可见，半胚在体外停留时间对半胚成活力的影响较大，超过4个小时后存活力会大大降低。 　　4 胚胎切割技术的应用 　　4.1 胚细胞核移植 　　胚胎切割可为基因治疗和基因活性的研究提供有利的动物模型。早期胚胎细胞是一群遗传上同质的细胞，以胚胎细胞作为核供体，进行动物核移植，可为各项研究提供大量材料。Meng[14] 等（1997）将猕猴的单个卵裂球进行卵母细胞注射，经过体外培养和移植后，生出一对不同性别的两个后代。1998年，Le[15]等分离牛的单个卵裂球作为核供体，生出克隆牛。 　　4.2 构建异胚重构体 　　将供体的细胞核，移植到处于第二次减数分裂中期的去核卵母细胞中，在卵母细胞相关因子的作用下，细胞核发生重编程恢复到发育的起点状态，重构胚具有重新发育成新个体的能力。制作重构胚并将其移植到受体中，让其生长发育成为新的动物，这也是制备转基因动物的方法。 　　4.3 生产嵌合体 　　应用显微操作技术，将同种或异种胚胎的卵裂球分离出来，装入同一个透明带内，将两个半胚融合在一起，经体外培养后移植入受体中，嵌合体动物对于研究种间妊娠中母胎之间的相互作用和母体的免疫识别有重要意义。 　　4.4 胚胎性别鉴定 　　在胚胎移植前将胚胎切割约十分之一，然后将取下的部分通过染色体分析、H-Y抗原抗体免疫学和PCR技术进行性别鉴定，在胚胎早期即可得知胚胎性别，进而生产出已知性别的动物，在动物的性别需要育种中意义重大。 　　4.5 生产同卵双生后代 　　在牛上不仅可以移植半胚生产同卵双胎，增加后代数量，而且可避免异性双胎不孕现象的发生。清家升[16]（1991）报道，每头受体牛移植两枚半胚和一枚半胚的胚胎着床率分别53.8%和48.4%，同时移植两枚半胚的双犊率为15.4%，而分别移植半的同卵双犊率为45.2%。 　　4.6 保存珍稀家畜动物的种质资源 　　胚胎分割技术可以增加优秀种畜、濒危珍稀动物以及有价值的转基因动物的数量，并且根据需要可长期保存这些动物的物种。 　　5 小结 　　胚胎切割技术可使胚胎数量成倍地增长，获得到同卵双生后代，在试验研究和濒危动物的保种中具有重要的应用价值。但胚胎分割技术也存在半胚移植后的妊娠率和产仔率不高，后代体质弱、体重低等问题，这需要研究者从胚胎分割方法、分割胚的有效培养、保存方法等方面进一步研究，提高分割胚的妊娠率，同时随着生物技术的不断发展，胚胎分割技术的应用价值也会有更广阔的应用前景。