5.核酸杂交.pptVIP

核酸杂交 核酸杂交基本原理 1 核酸变性（Denaturation） 双链DNA间氢键断裂，变为两条单链的过程。 增色效应：变性时溶液对紫外光吸收值逐渐变大。（260nm） Tm值：变性温度或解链温度指增色效应达到一半时，即一半DNA双链解链时的温度。 Tm值与G+C含量呈正比 引起核酸变性的因素 酸、碱、热、变性剂（尿素、胍） 有机溶剂（乙醇、丙酮） Tm（85-95度之间） Tm=69.3+0.41（G+C） Tm的影响因素： GC含量；离子强度； PH值；变性剂 核酸的几个基本概念 2. 核酸的复性（Renaturation） 互补单链重新缔合成双链的过程。 减色效应 复性速度影响因素： DNA大小；离子强度；DNA浓度； 分子杂交概念 两条单链之间存在完全或部分碱基序列互补，相互结合形成双链（molecular hybridization） 核酸杂交类型 DNA-DNA；DNA-RNA；RNA-RNA； OLIGO-DNA；OLIGO-RNA 核酸探针 探针概念（PROBE）：广义 核酸探针：指能与特定核苷酸序列发生特异性互补杂交，杂交后又能被特殊方法检测的已知被标记的核苷酸序列。 标记物（示踪物）分类 1. 同位素标记 2. 非同位素标记 探针的种类 基因组探针（某一基因的全部或部分序列）；应主义内含子和