17314245-细胞生物学实验-生命科学与工程学院-西南科技大学.doc

《细胞生物学实验》教学大纲 【课程编号【英文名称】Experiment of Cell Biology 【课程学时】16 【适用专业】生物工程 本实验课程的教学目的和要求 细胞生物学是一门实践性强，对实验技能实验仪器要求较高的课程，因此开设本课程的目的是掌握细胞生物学实验设备的操作方法，具备观察和研究细胞结构与功能的基本方法，学会发现问题和解决问题的基本技能，为毕业后从事生物学相关的科研和教学工作奠定基础。应在植物学实验、无机及分析化学实验、有机化学实验和生物化学实验等课程之后开设应在 √ √ 2 不同因素对细胞膜的通透性影响 2 √ √ 3 植物细胞骨架的光学显微镜观察 2 √ √ 4 细胞器的分离与提取技术 2 √ √ 5 动植物细胞线粒体和液泡系的超活染色与观察 4 √ √ 6 细胞融合 4 √ √ 7 环境因素对细胞染色体的影响 8 √ √ 实验学时合计 24 16 8 0 0 16 8 实验个数合计 7 6 1 0 4 3 2、实验项目说明 实验一、细胞凝集反应（2学时） 【目的要求】通过本实验可以使学生熟悉并理解细胞凝集反应的原理，掌握临时装片技术和显微镜的使用方法；能熟练地将理论教学中细胞膜的相关知识与实际操作观察相结合。 【内容】显微镜下观察血球凝集现象，学会配置PBS缓冲液和兔子静脉采集血液方法。 【方法】使用教具示范，要求学生亲自操作临时制片法、无菌法抽取兔子静脉血（含抗凝剂）。 【参考资料】 杨汉民编，细胞生物学实验，高等教育出版社出版，1997年第二版。 实验二、不同因素对细胞膜的通透性影响（2学时） 【目的要求】了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度；能熟练地将理论教学中细胞膜的相关知识与实际操作观察相结合。 【内容】制备羊血细胞悬液和低渗溶液、等渗盐溶液，将不同等渗溶液加入到相同体积的羊血中观察溶液颜色变化和溶血现象。 【方法】使用教具示范，要求学生亲自操作。 【参考资料】 王金发编，细胞生物学实验教程，科学出版社出版，2003年第一版。 实验三、植物细胞骨架的光学显微镜观察（2学时） 【目的要求】掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状 结构。 【内容】植物细胞用适当浓度的TritonX—100处理 后，可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好。考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)是一种蛋白质染料，处理后的材料用考马斯亮蓝R250(考马斯亮蓝R250) 染色后，用光学显微镜观察，可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。 【方法】使用教具示范，要求学生亲自操作。 【参考资料】 王金发编，细胞生物学实验教程，科学出版社出版，2003年第一版 杨汉民编，细胞生物学实验，高等教育出版社出版，1997年第二版。 实验四、细胞器的分离与提取技术（2学时） 【目的要求】用差速离心法分离动植物细胞核与染色体；了解差速离心的原理；掌握有关操作方法。 【内容】样品处理；离心；分离物鉴定；镜检。 【方法】使用教具示范，要求学生亲自操作。 【参考资料】 王金发编，细胞生物学实验教程，科学出版社出版，2003年第一版。 实验五、动植物细胞线粒体和液泡系的超活染色与观察（4学时） 【目的要求】观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；学习一些细胞器的超活染色技术。 【内容】样品处理；制片；染色；镜检。 【方法】理论讲授结合教具示范，要求学生亲自操作。 【参考资料】 杨汉民编，细胞生物学实验，高等教育出版社出版，1997年第二版。 实验六、 细胞融合（4学时） 【目的要求】了解细胞融合的原理，初步掌握用PEG诱导细胞融合的方法。 【内容】细胞悬液的制备；取悬液1mL到1个试管中，加入0.5～0.8 mL预热的50％PEG混匀，置于37℃水浴中温浴； 再加入Ringer或Hanks液5ml以终止PEG的作用;取血细胞悬液1滴滴于载玻片上，再加入0.2%次甲基蓝溶液1滴,盖上盖玻片。利用光学显微镜或倒置显微镜(高倍) 观察2个靠近细胞或3个细胞形成融合的过程。 进行多个视野的测定，统计平均融合率。 【方法】理论讲授结合教学录像进行示教。 【参考资料】 王金发编，细胞生物学实验教程，科学出版社出版，2003年第一版。 实验七、环境因素对细胞染色体的影响（8学时） 【目的要求】学会鉴别外界条件诱变染色体改组的各种类型，为进行环境监测和诱变育种提供细胞学方面的依据；了解影响染色体改组的一些环境因素，且了解这些因素对植物细胞减数分裂期染色体的作用。 【内容】取材、样品处理；制片；镜检。 【方法】理论讲授结合教具示范，要求学生亲自