现代分子生物学课件-7.ppt.ppt

原核基因调控机制的类型和特点 原核生物的基因调控主要是转录调控，包括负转录调控和正转录调控。 在负转录调控系统中，调节基因的产物是阻遏蛋白（repressor），阻止结构基因转录。根据其作用特征又分为负控诱导和负控阻遏二大类。 （1）弱化子对基因活性的影响 （2）降解物对基因活性的影响：当葡萄糖存在时，在培养基中加入乳糖，乳糖操纵子也不启动，这是因为萄萄糖的降解物对其具有抑制作用。 （3）细菌的应急反应 lac操纵子本底水平的表达 lac操纵子本底水平的表达是必须的。 为什么？ 大约每个世代中有1-5个mRNA分子。 大肠杆菌对乳糖的反应 酶的合成是受到乳糖的诱导的。 为什么三种酶拷贝数不一样？ 不同的酶在数量上的差异是由于在翻译水平上受到调节所致： （1）lac mRNA与翻译过程中核糖体脱离，终止翻译，形成从mRNA从5’到3’的蛋白质合成梯度； （2） lac mRNA中，A基因比Z基因更易降解。 7.7.7 翻译的阻遏 大肠杆RNA菌噬菌体Qβ中发现，其基因组编码的RNA复制酶可以和外壳蛋白的翻译起始区结合抑制蛋白质的合成。 7.6.6 魔斑核苷酸水平对翻译的影响 魔斑(magic spot) ppGpp、pppGpp （P236） 又称警报素(alarmone) 当细胞缺乏氨基酸时产生ppGpp，抑制蛋白质的合成。 （3）mRNA二级结构：mRNA 5’端二级结构会影响核糖体30S亚基与mRNA的结合，造成蛋白质合成效率上的差异。 7. 7. 2 mRNA稳定性对转录水平的影响 mRNA在细菌内都有一定的半衰期，平均为2—3min；所有细胞内都有一系列核酸酶，用来清除核酸酶。 7. 7. 3 调节蛋白的调控作用 细菌中有些mRNA结合蛋白可激活靶基因的翻译；相反，mRNA特异性抑制蛋白则可通过与核糖体竞争性地结合mRNA分子来抑制翻译的起始。 7. 7. 4 反义RNA的调节作用 RNA调节是原核生物基因表达转录后调节的另一种重要机制。细胞菌响应环境压力的变化，会产生一些小RNA分子，与mRNA局部配对，导致翻译过程关闭，或导致目标mRNA分子降解。 7. 7. 5 稀有密码子对翻译的影响 已知dnaG 、rpoD和 rpsU属于大肠杆菌基因组上的同一个操纵子，而3个基因产物在数量上却大不相同。大肠杆菌细胞内仅有50个拷贝的dnaG蛋白，却有2800个拷贝的rpoD蛋白，更有高达40 000个拷贝的rpsU蛋白。细胞通过翻译调控，导致该现象。 dnaG序列中存在不少稀有密码子（表7-10）。很明显，稀有密码子AUA在高效表达的结构蛋白及σ因子中均极少使用，而在表达要求较低的dnaG蛋白中使用频率就相当高。 表7-10 几种蛋白质中异亮氨酸密码子使用频率比较 蛋白质 AUU（%） AUC（%） AUA（%） 结构蛋白 37 62 1 σ亚基 26 74 0 DnaG蛋白 36 32 32 许多调控蛋白如LacI、AraC、TrpR等在细胞内含量很低，这些基因中密码子的使用频率与dnaG相似。科学家认为，由于细胞内对应于稀有密码子的tRNA较少，高频率使用这些密码子的基因翻译过程容易受阻，影响了蛋白质合成的总量。 7. 7. 6 重叠基因对翻译的影响 正常情况下，trp操纵子中5个基因产物是等量的，但trpE突变后，其邻近的trpD产量比下游trpBA产量要低得多。研究trpE和trpD以及trpB和trpA两对基因中核苷酸序列与翻译的关系，发现trpE基因的终止密码子和trpD基因的起始密码子共用核苷酸。 trpE—Thr——Phe——终止 ACU — UUC — UGA —UGG—CU AUG — GCU Met—Ala— trpD trpB和trpA基因也存在着翻译耦联现象。实验证明，耦联翻译可能是保证两个基因产物在数量上相等的重要手段。 Glu—Ilu—终止（trpB） GAA—AUC— UGAuggaa AUG—GAA Met—Glu—trpA 大肠杆菌gal操纵子中也存在基因重叠现象。galT的终止密码子虽然与galK的起始密码子相隔3个核苷酸，ga