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选修3 现代生物科技知识点整理 专题 1 基因工程、生物技术的安全性和伦理问题 一、基因工程的诞生、原理及技术 1、基因工程的诞生 （1）概念：是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA 重组和转基因技术，赋予生物以 新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA 分子水平上进 行设计和施工的，又叫做DNA 重组技术。 （2）基因工程诞生的理论基础与技术支持 ①理论基础：DNA 是遗传物质；DNA 双螺旋结构和中心法则的确立；遗传密码的破译。 ②基因转移载体的发现；工具酶的发明；DNA 体外重组的实现；重组DNA 表达实验的成功。 2、基因工程的三大操作工具 （1）“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 （限制酶） 来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。化学本质：蛋白质 功能：能够识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定 部位的两个 核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 切割形式：错切 （黏性末端）和平切 （平末端）。 作用：催化作用，可重复利用 ①限制酶在原核生物中的作用： 限制酶是细菌的一种防御型工具，在原核生物中主要切割外源DNA 使之失效，从而达到保护自身 的目的。 ②限制酶不切割自身DNA 的原因： 长期进化过程中形成了一整套防御机制，其DNA 分子不具备这种限制酶的识别切割序列，或者 通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 （2）“分子缝合针”——DNA 连接酶 两种DNA 连接酶 （Eco-DNA 连接酶和T -DNA 连接酶）的比较： 4 ①相同点：都缝合磷酸二酯键 ②区别：Eco-DNA 连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二 酯键连接起来；而T -DNA 连接酶来源于T 噬菌体，能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较 4 4 低。 3 （）“分子运输车”——载体 A、载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA 片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA 的鉴定和选择。 B、最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复 制能力的双链环状DNA 分子。 C、其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒 3、基因工程的基本操作程序 （1）目的基因的获取 1 ①目的基因：编码蛋白质的结构基因。 ②目的基因的获取方法：a、从供体细胞直接获取；b、从基因文库中获取；c、利用mRNA 反转录 形成；d、利用PCR 扩增技术；e、人工合成。 ③基因文库、基因组文库、cDNA 文库概念及作用： 基因组文库含有一种生物的全部基因；而cDNA 文库含有一种生物部分基因，二者都是基因文库。 有了基因文库，就可随时从中提取所需要的目的基因，引入受体细胞使之表达。 （2）基因表达载体的构建 ①目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发 挥作用。 ②组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 A、启动子：是一段有特殊结构的DNA 片段，位于基因的首端，是RNA 聚合酶识别和结合的部 位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 B、终止子：也是一段有特殊结构的DNA 片段 ，位于基因的尾端。 C、标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选 出来。常用的标记基因是抗生素基因。 （3）将目的基因导入受体细胞——转化 ①将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和 花粉管通 道法等。 ②将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。 ③将目的基因导入微生物细胞： A、原核生物作为受体细胞的原因是：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。