酶抗体应用实现热启动PCR.pdfVIP

ISSN 中国生物化学与分子生物学报 2008 年 5 月 CN 　113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 24 (5) :475～480 ·技术与方法 · 酶抗体应用实现热启动 PCR 1) 2) 2) 林 　晴 , 　许木于 , 　李庆阁 ( 1) 福建中医学院 , 福建 福州 350001 ; 2) 厦门大学生命科学学院 , 福建 厦门　361005) 摘要 　通过制备酶抗体 ,形成抗原抗体复合物 ,使得酶在较高的温度 95 ℃,1 min ,得以释放发挥聚 合活性 ,实现热启动 PCR . 建立的热启动 PCR 体系灵敏度高 ,可以检测到 1 个拷贝的DNA 分子 ,较 普通 PCR 体系提高了3 个数量级 ,并且具有较好的线性关系. 这种通过形成抗原抗体复合物达到 热启动 PCR 目的的方法的建立 ,具有着重要的意义 ,是提高 PCR 灵敏度和特异性的重要方法之一. 关键词 　热启动 ; 抗体 ; PCR 中图分类号 　Q503 Using Antibodies Against TaqFS Polymerase for Hotstart PCR 1) 2) 2) L IN Qing , XU MuYu , L I QingGe ( 1) Fuj ian University of Traditional Chinese Medicine , Fuzhou 　350001 , Fuj ian , China ; 2) School of L if e Sciences , Xiamen University , Xiamen 　361005 , Fuj ian , China) Abstract 　Hotstart PCR is advantageous for its higher speciality , sencitivity and linear amplification . We have used an antibodies against TaqFS polymerase for the setup hotstart PCR reactions. The antibody used could block the activity of TaqFS polymerase at low tempreture (or below) . When heated at high temperature 95 ℃, 1 min , the antibody was denatured and the activity of TaqFS polymerase was released . Our hotstart PCR system was capable of detecting as low as one copy of template DNA . Key words 　hotstart ; antibody ; PCR 　　1983 年 ,美国 PECetus 公司 Mullis 发明了聚合 1 　材料与方法 (