重组葡萄糖脱氢酶基因的表达研究.pdfVIP

第15 卷第4 期 江 苏 大 学 学 报（医 学 版） VoI. 15 No. 4 2005 年8 月 JournaI of Jiangsu University（medicine ） Aug. 2005 重组葡萄糖脱氢酶基因的表达研究 周丽萍，姜旭淦，徐顺高，郑铁生，王卉放 （江苏大学医学技术学院生物化学教研室，江苏 镇江21200 1 ） ［摘 要］ 目的：将重组的葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中表达，优化表达条件，以期获得较高活力的葡萄糖脱氢 酶。方法：将枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因与表达载体pET22b 连接后转化至大肠杆菌JM109 （DE3 ）进行表达，经 对发酵时间、诱导物浓度、诱导时间以及细胞破碎等条件的控制，实现葡萄糖脱氢酶的高表达。结果：重组质粒转化 菌发酵2 h 后进入对数生长期，诱导剂IPTG 浓度为0 . 5 mmoI/ L ，诱导2 . 5 ~ 3 h 后用240 W 超声破碎细胞，表达的粗 提酶活力比诱导前提高了近千倍。SDS电泳显示重组菌能表达单体分子量为31. 5KD 的特异性蛋白。结论： 表达质粒的拷贝数、宿主菌培养条件、细胞破碎方式等均能影响酶的表达量。 ［关键词］ 葡萄糖脱氢酶；表达；基因 @75 ；R394 . 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 167 1 - 7783（2005 ）04 - 0291 - 03 ［中图分类号］ Study on the Expression of Recombinated Glucose Dehydrogenase Gene ZHOU Li-p ing ，JIANG Xu-gan ，X U Shun-gao ，ZHEN Tie-sheng ，WANG Hui-f ang ， （Department of Biochemistry ，SchooI of MedicaI TechnoIogy ，Jiangsu University ，Zhenjiang Jiangsu 21200 1，China ） ［Abstract ］ Objective ：To express the recombinated gIucose dehydrogenase gene in E. coli ，and to opti- mize expression conditions in order to gain the high activity enzyme. Methods ：The gene for the GDH from B. subtiIis was Iigated with vector pET22b ，then transducted into E. coIi JM109 and expressed. The expres- sion of high activity for GDH was studied through the controI of conditions such as cuIture time ，inducer concentration ，inductiontime and ceII disrepution. Results ：The recombinated pIasmid entered up to Iog- phase after 2 hours cuIture. The optimaI