链霉菌查尔酮合成酶基因克隆及原核表达载体构建.pdfVIP

20 13 5 May ，20 13 年 月 重庆文理学院学报 32 3 Journal of Chongqing University of Arts and Sciences Vol. 32 No. 3 第 卷 第 期 链霉菌查尔酮合成酶基因克隆及 原核表达载体构建 1 2 2 2 2 ， ， ， ， ， 肖 静 吕玉红 李 园园 陈雪梅 彭廷文 2 2 2 2 2 ， ， ， ， 周春伶 曾令 荣 保玉心 凌 锌 岳 昌武 (1． ， 563000 ;2 ． ， 563000) 遵义医学院形态学实验室 贵州 遵义 遵义医学院贵州省微生物资源及药物开发特色重点实验室 贵州 遵义 ［ ］ Genbank chs 摘 要 根据 数据库 已知的链霉菌的查 尔酮合成酶基因 的保 守区设计 基因特异 ， DNA ， PCR 1 chs ， TA 简并 引物 土壤 总 为模板 利 用 技术 扩增得到 该 条 基因 编码 区 通过 克 、 : chs ． 5 隆 测序和 同源比对及进化分析表明 该基因 为放 线菌来源 基因 分别在该基因 末端和 3 NcoI EcoR I ， 2 末端分 别 引入 的限制 酶 和 酶切位 点 利 用上述 种 限制 酶分 别酶切导入 到 psimple － T / chs pET32a ， ， 载体和原核表达 凝胶 回收 目的片段后 将二者连接并转化 大肠杆 菌 ， PCR 、 ，3730 ， 感受态细胞 转化子经菌液 筛选 双酶切鉴定后 测序 结果表明 该基因全 长编码 区 1089 bp ， 362 ， ( PI) 5 ． 4 1、 3 965 为 推测该基因编码全长为 个氨基酸残基 等 电点 为 分子量为 道 CHS ． ， Streptomyces lividans 尔顿含有 保 守功能区的酸性蛋 白质 分析表明