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第八章 核糖体(ribosome) 核糖体的类型与结构 多聚核糖体与蛋白质的合成 第一节 核糖体的类型与结构 核糖体是合成蛋白质的细胞器，其唯 一的功能是按照mRNA的指令由氨基酸高 效且精确地合成多肽链。 核糖体的基本类型与成分 核糖体蛋白质与rRNA的功能分析 一、核糖体的基本类型与成分 核糖核蛋白体,简称核糖体(ribosome) 基本类型 附着核糖体 游离核糖体 70S的核糖体 80S的核糖体 主要成分 r蛋白质：40%，核糖体表面 rRNA:60%,，核糖体内部 二、核糖体的结构 结构与功能的分析方法 核糖体的结构 结构与功能的分析方法 离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； 双向电泳技术可显示出E.coli核糖体在装配各阶 段中，与rRNA结合的蛋白质的类型 电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在 核糖体的亚单位上的定位。 X射线衍射分析可分析核糖体生物学活性部位。 核糖体的结构 1、核糖体蛋白质通常定位在核糖体的表面， 或填充于rRNA的缝隙。 核糖体蛋白质有一个球形结构域 （分布于核糖 体表面）和伸展的尾部 （伸入核糖体内折叠的 rRNA分子中） 核糖体蛋白质能够稳定rRNA，有助于RNA催化 蛋白质合成时自身构象的改变。 对核糖体高分辨率的X射线衍射图谱分析表 明： 1）每个核糖体有供tRNA结合的3个位点 2 ）在核糖体大小亚基结合面，无核糖体蛋白质分 布 3 ）催化肽键形成的活性位点由RNA组成 4 ）大多数核糖体蛋白质有一个球形头部和伸展的 尾部组成 2、对于rRNA，特别是16SrRNA的结构研究已 积累的丰富的资料。 16SrRNA的一级结构是非常保守的 16SrRNA的二级结构具有更高的保守性： 臂环结构(stem-loop structure) rRNA臂环结构的三级结构模型 涉及的多数因子为G蛋白(具有GTPase活性)，核糖体上 与之相关位点称为GTPase相关位点。 最近人们成功地制备L11-rRNA复合物的晶体，获得了 其空间结构高分辨率的三维图象。 这一结果证实了前人用各种实验技术所获得的种种结论 提出直观、可靠且比人们的预料更为精巧复杂和可能的 作用机制，从而为揭开核糖体这一具有30多亿年历史 的古老的高度复杂的分子机器的运转奥秘迈出了极重 要的一步。 二、核糖体蛋白质与rRNA的功能分析 核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点 在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点 与mRNA的结合位点 与新掺入的氨酰-tRNA 的结合位点——氨酰基位点，又 称A位点 与延伸中的肽酰-tRNA 的结合位点——肽酰基位点，又 称P位点 肽酰转移后与即将释放的tRNA 的结合位点——E位点 (exit site) 与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶 (即延伸因子EF-G)的结合位点 肽酰转移酶的催化位点 与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和 终止因子的结合位点 在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 核糖体蛋白 在核糖体中rRNA是起主要作用的结构 成分 r蛋白质的主要功能 核糖体蛋白 很难确定哪一种蛋白具有催化功能： 在E.coli中核糖体蛋白突变甚至缺失对蛋白 质合成并没有表现出 “全”或 “无”的影响。 多数抗蛋白质合成抑制剂的突变株，并非由 于r蛋白的基因突变而往往是 rRNA基因突变。 在整个进化过程中rRNA的结构比核糖体