专题九现代生物科技专题精编.doc

专题九 现代生物科技专题 核心考点整合 考点整合一：基因工程 1．基因工程的基本操作程序（1）目的基因的获取①从基因文库中获取 基因组文库：包含一种生物所有基因的基因文库。 部分基因文库：包含一种生物的一部分基因，如cDNA文库。②利用PCR（多聚酶链式反应）技术扩增目的基因 目的——获取大量的目的基因；原理——双链DNA的复制；条件——需要DNA模板、引物、四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶和酶促反应所需的离子，同时还要控制温度；过程——变性、复性和延伸。③人工合成 如果基因比较小、核苷酸序列已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接合成。（2）基因表达载体的构建（基因工程的核心） 一个基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞①导入植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法等；②导入动物细胞：显微注射技术，即采用显微注射仪将目的基因注入受精卵；③导入微生物细胞：转化法。早期用原核生物作为受体细胞，以大肠杆菌应用最广。一般是将细菌用氯化钙处理制成感受态细胞，再与重组表达载体DNA分子混合，在一定温度下完成转化过程。（4）目的基因的检测与鉴定 步骤 检测内容 方法 分 子 检 测 第一步 转基因生物染色体的DNA是否插入了目的基因 DNA分子杂交技术（DNADNA之间） 目的基因是否转录出mRNA 分子杂交技术（DNAmRNA之间） 目的基因是否翻译成蛋白质 抗原—抗体杂交技术（） 平鉴定 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；基因工程产品与天然产品活性比较，以确定功能活性是否相同等 2.基因工程中的工具（1）运载体 作为运载体必须具备三个条件：①能在宿主细胞中保存下来并大量复制；②有一个至多个限制酶切位点；③有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌割质粒携带的氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。 常用的运载体主要有质粒（双链环状DNA分子）、噬菌体或某些病毒。（2）相关酶 酶的作用 限制性内切酶 能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，形成黏性末端或平末端 DNA连接酶 将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶断开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 【例1】 （2009·天津理综）为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程。 据图回答：①图中基因组文库________（小于/等于/大于）cDNA文库。②B过程需要的酶是_____________；A．C过程中________（可以/不可以）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。③目的基因I和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中________和________为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是________。 大于 逆转录酶 可以 DNA DNA 耐高温 [解析] 解答第①小问的关键是要搞清基因组文库和cDNA文库两个概念之间的区别。基因组文库为全部基因文库，cDNA文库为部分基因文库，二者的来源不同，前者为DNA用限制酶切割所获得的一定大小范围的DNA，后者为mRNA经反转录得到的互补DNA，基因组文库所包含的信息大于cDNA文库。由mRNA形成DNA是一个逆转录过程，需要用到的酶是逆转录酶。因为A．C两过程的目的都是筛选出含相同目的基因的菌株，可以使用同一种探针进行筛选。解答第③小问的依据是目的基因的获取途径。 目的基因除从文库中获取外，还可以通过PCR扩增，其做法就是通过利用图中DNA和cDNA为模板进行扩增。答最后一空时要想到PCR过程的特点及酶与温度的关系，因该过程解链时的温度较高，90～95℃，故用的酶必须是耐高温的，否则酶就会变性失活。 【互动探究1】 下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： BamH Ⅰ Hind Ⅲ EcoR Ⅰ Sma Ⅰ 识别序列 及切割位点 ↓ GGATCC CCTAGG ↑ ↓ AAGCTT TTCGAA ↑ ↓ GAATTC CTTAAG ↑ ↓ CCCGGG GGGCCC ↑ （1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。（2）若对图中质粒进行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越______。（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是___________