02核酸化学要点.ppt

介质中的离子强度 离子强度较高，Tm较高，溶解温度范围较小 DNA的应保存应在含盐的缓冲液中 2） 复性:变性DNA在适当条件下，两条互补链可重新恢复天然的双螺旋构象，称为复性 热变性DNA经缓慢冷却后即可复性，也称为退火 减色效应（hypochromicity )：变性核酸复性时紫外吸收值下降的现象 影响复性的因素： DNA片段越小，复性越快； DNA复杂程度越低,复性越快; DNA浓度越大，复性越快。 DNA复性速度受温度的影响。复性 时温度缓慢下降才可使其重新配对 复性。如加热后将其迅速冷却至 4 ℃以下，则不可能发生复性 比Tm低25℃为DNA复性的最佳条件 Cot：在一定条件下表示复性的速度Co－变性DNA的原始浓度--(mol/L). t--复性时间(s) 1944年，O.T.Avery（美） 肺炎链球菌的转化实验,首次证明DNA是细菌遗传性状的转化因子。 十年后证明DNA是遗传物质 S R S+R S菌体的DNA + R S 六、 核酸的生物学功能 1 核酸与遗传信息的传递和表达 DNA是基本的遗传物质 DNA 复制 RNA 转录 蛋白质 翻译 逆（反）转录 RNA复制 中心法则 翻译---以mRNA为模板合成蛋白质的过程 逆转录---以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成 由逆转录酶催化进行。 转录---以DNA的一条链为模板在RNA聚合酶催化下，按照碱基配对原则，合成一条与DNA链的一定区段互补的RNA链的过程 mRNA---直接决定多肽上氨基酸次序 DNA上核苷酸的排列次序—最终决定多肽上氨基酸的排列次序 不论是DNA或mRNA，都是由4种核苷酸构成。这4种核苷酸如何编制成遗 传密码，遗传密码又如何被翻译成20种氨基酸组成的多肽，这就是蛋 白质生物合成中的遗传密码的翻译问题 遗传密码 应用以上所述方法，用了四年时间，于1965年确定了编码20种天然氨基酸的60多组密码子，编出了遗传密码字典 mRNA 信使RNA rRNA 核糖体RNA tRNA 转运RNA 2 核酸与蛋白质的生物合成 2 核酸与蛋白质的生物合成 3、DNA的损伤修复 DNA的损伤： DNA在复制时产生错配 病毒基因整合 某些物化因子如紫外光、电离辐射和化学诱变等，破坏DNA的双螺旋结构 DNA的损伤后，影响DNA的复制，并使DNA的转录和翻译也跟着变化，因而表现出异常的特征（生物突变） DNA的损伤修复——细胞能自行修复DNA的损伤 四种修复途径:光复活、切除修复 重组修复和应答修复（亦称暗修复） 光复合修复：修复 TT 高度专一的修复方式， 它只作用于紫外线引起的DNA嘧啶二聚体 ⌒ 光修复酶的激活需300-600nm波长的光 切除修复： 将DNA分子中的受损伤部分切除，以完整的那条链为模板再重新合成。特异内切酶、DNA聚合酶、 DNA外切酶、DNA连接酶均参与。 　　细胞内有许多特异的 DNA糖苷酶，能识别DNA中不正常的碱基，并将其水解下来 重组修复 先复制再修复 DNA损伤面积较大，来不及修复就进行复制 其损伤部位失去模板作用，造成子链上缺口出现 通过链间的交换，从完整母链将相应核苷酸序列片段移到子链填补该缺口造成母链的缺口，再通过DNA-pol I、DNA连接酶进行修复 这种修复的不足之处— 原损伤部位仍然存在，但随着多次复制，损伤链所占比例越来越少 应答修复（应急反应）（SOS response） 由DNA损伤或抑制复制的处理所引起的一系列复杂的诱导效应 此过程诱导产生切除修复和重组修复中的关键蛋白和酶，从而加强切除修 复和重组修复的能力 产生的DNA聚合酶无校对功能 通过SOS修复，细胞可存活，但DNA保留的错误较多，会引起长期广泛的突变，往往导致细胞恶变 所以会有2种结果：修复或变异（进化） 限制性内切酶：简称限制酶，一类对DNA具有碱基专一性的内切酶 3、非专一性核酸酶类：既能作用于RNA也能作用于DNA 蛇毒磷酸二酯酶：从多聚核苷酸链的3’—羟基端开始，逐个切开5’—核苷酸与相邻核苷酸之间的酯键 牛脾磷酸二酯酶：从多聚核苷酸链的5’—羟基端开始，逐个切开3’—核苷酸与相邻核苷酸之间的酯键 2.3.1.2 与核酸结构研究有关的工具酶 2.3 核酸的结构 2.3.1 核酸的一级结构 2.3.1.1 核酸分子中核苷酸之间的连接 RNA一级结构 1、无分支的线形多聚核糖核苷酸 2、由四种核糖核苷酸组成：A、U、C、G。RNA分子中还有某些稀有碱基 3、3′，5′-磷酸二酯键连接。尽管RNA分子中核糖