葡萄糖测定试剂盒---氧化酶法.doc

葡萄糖测定试剂盒---氧化酶法 货号：M100016 描述：食物中的糖类物质吸收进入血液转化为葡萄糖，为组织细胞提供能量。糖尿病等多种代谢异常状态伴随血糖升高，营养不良、饥饿、或剧烈运动时血糖降低。本试剂盒采用葡萄糖氧化酶(GOD)法?，精确特异测量生物样品中葡萄糖浓度，是世界卫生组织推荐也是中国《全国临床检验操作规程》指定的临床血糖检测方法，用于临床和基础研究的葡萄糖浓度检测。 测定原理：根据著名的Trinder反应1,2，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2)；然后，过氧化物酶(POD)催化过氧化氢，并使色原物质(如4-氨基安替比林偶联酚)生成红色醌亚胺类化合物，颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。在500nm处检测吸光度(OD)值可测量葡萄糖含量。 用途：测定人及动物血清、血浆、脑脊液、组织细胞孵育液及其裂解液等样品中的葡萄糖含量。尿液葡萄糖测定推荐使用“邻甲苯胺(o-Toluidine)法试剂盒”。 试剂组成 (200次微量检测)： 葡萄糖标准品 5 mmol/L (等于90 mg/100 ml或90 mg/dl)，0.2 ml 试剂R1，32 ml 试剂R2，8 ml 试剂常温运输。避光4 oC保存6月。混合的工作液4oC稳定1个月。 所需仪器：(721型)可见光分光光度计、酶标仪、自动或半自动生化分析仪。波长500nm (480~550nm)。 测定操作：可采用手工、半自动、全自动方式测定。使用1 ml比色杯测试时反应体积为1ml，采用微板测试时反应体积0.2 ml。根据是否预先混合试剂R1及R2，分为单一试剂和双试剂方式测定： 为减少取样误差和测量误差，推荐采用预先混合的单一工作液试剂 (见表1)：取4体积试剂R1与1体积试剂R2混合(4:1比例)配制成工作液。混合好的工作液应尽快使用，2-8 oC避光可存放1周，也可－20 oC长期保存。如果加入工作液的空白管500 nm吸光度大于0.3，不能使用应弃去试剂。 测定少数样品可采用双试剂方式 (见2)，但应分别加入试剂R1，然后分别加入试剂R2。 测试前应使反应管内的测量工作液升温到室温。不同反应管之间不可避免地存在加样间隔而使实际反应时间有所不同，按照推荐的方法及顺序加样能最大限度减小这种测量误差。 参照以下表格，依次加入待测样品或标准品。由于线性关系甚佳，标准管设置并需很多：初次测定可分别取2、4、8 μl标准品与200 μl工作液混合，测定后获得标准曲线；以后的测定可只设置标准品单管或双管即可。 反应：于20-25 oC室温反应10-30分钟达到平衡并保持稳定，也可37 oC保温10分钟。此方法对反应时间要求不很严格，但样品管数多时为保证各管达到平衡可延长反应至40分钟以上。 测定工作波长500nm (480~550 nm)，光径1cm，测定测各管吸光度值(OD值)。 计算：葡萄糖浓度(mmol/L) = 标准品浓度 × (测定管吸光度-空白管吸光度) / (标准管吸光度-空白管吸光度)。不同单位之间的换算公式：1 mmol/L = mg/dL x 0.0556；1 mmol/L × 18 = 1 mg/dL。 以下表格举例列出几种不同的测定和加样方式： 表1. 单一试剂测定 (手工、半自动或全自动测定) 自动测试或手工微板测试，反应体积0.2ml 1 ml比色杯手工测试，反应体积1ml 加入物 空白管 标准管 测定管 加入物 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 2 μl 0 0 蒸馏水 10 μl 0 0 标准液 0 2 μl 0 标准液 0 10 μl 0 标本 0 0 2 μl 标本 0 0 10 μl 工作液 200 μl 200 μl 200 μl 工作液 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 表2. 双试剂测定 (全自动、半自动或手工测定) 双试剂手工微板测定 双试剂全自动生化仪测定 加入物 空白管 标准管 测定管 加入物 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 2 μl － － 蒸馏水 2 μl － － 标准液 － 2 μl － 标准液 － 2 μl － 标本 － － 2 μl 标本 － － 2 μl 试剂R1 160 μl 160 μl 160 μl 试剂R1 160 μl 160 μl 160 μl 试剂R2 40 μl 40 μl 40 μl 37 oC保温1分钟，温度平衡 试剂R2 40 μl 40 μl 40 μl 注意事项： 人空腹血清葡萄糖参考值3.89-6.11 mmol/L (70-110 mg/dl)，低血糖症临界水平2.7-3.89 mmol/L，高血糖症临界水平6.11-7.22 mmol/L。上述数值仅供参考，各实验室应建立自己的参考值范围。 方法学评价：葡萄