南方医科大学博士硕士中期考核分子生物学解析.docVIP

一、名词解释 1、 蛋白质的三级结构；整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置，即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。主要的化学键是：疏水键、离子键、氢键和范德华力。 2、锌指结构；是指一类具有指状结构的结构模体，这些具有锌指结构的蛋白大多都是与基因表达的调控有关的功能蛋白。是长度20到25个核苷酸的双股RNA，主要参与RNA干扰（RNAi）现象，以带有专一性的方式调节基因的表达真核生物中广泛存在的一种长约21到23个核苷酸的RNA分子通过与靶信使核糖核酸(mRNA)特异结合，从而抑制转录后基因表达, 在调控基因表达、细胞周期、生物体发育时序等方面起重要作用。LncRNA：是长于200核苷酸的不编码蛋白质的RNA分子，参与细胞内多种过程的调控。 4、顺式作用元件：与结构基因表达调控相关的，能够被基因调节蛋白识别和结合的DNA序列。 反式作用因子：能与顺式作用元件结合调节基因转录活性的蛋白质因子。 5、断裂基因；大多数真核生物基因的显著特征是在编码区内含有非编码的插入序列，因此被称为断裂基因，编码的序列为外显子；非编码序列为内含子。 6、信号序列；引导蛋白质定向转移的线性序列，通常有16-26个氨基酸残基，对所引导的蛋白质没有特异性要求。 8、荧光定量PCR 采用荧光标记探针对靶核酸进行定量分析，目前广泛用于基因表达检测、点突变检测、抗病毒药物筛选及其他临床基础研究等。 反向PCR可扩增中间一段已知序列，而两端序列未知的基因片段不扩增。 反向PCR的目的在于扩增一段已知序列旁侧的DNA是一种在DNA扩增反应中，以萤光染剂侦测每次聚合酶链锁反应（PCR）循环后产物总量的方法指发生在姐妹染色单体之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，甚至DNA－蛋白质、RNA－蛋白质的相互作用，筛选药物作用的蛋白靶点等。DNA(染色体DNA)和线粒体DNA的全部序列，既包括编码序列，也包括大量存在的非编码序列。 15、移框突变 指基因的碱基序列中发生单个核苷酸、数个核苷酸的缺失或插入，或核苷酸片段的缺失或插入，导致突变区域之后的三联体密码子阅读框移位，突变区以后碱基序列所编码多肽链的氨基酸序列和突变前不同。 16、程序性死亡 细胞通过各种各样内在和外在的刺激信号激活一个内在编码进化上保守的死亡程序，这一由基因调控的有序的过程称为程序性细胞死亡。 17、管家基因 是指在一个生物生命全过程中以及一个个体的所有细胞类型中均持续表达，很少受环境影响的基因。 18、转染（tansfection）指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。常用方法有电穿孔法、磷酸钙共沉淀法和脂质体融合法等。 19、选择性剪接：真核细胞基因表达所转录出的前体mRNA的剪接过程中，参加拼接的外显子可以不按其在基因组的线性分布次序拼接，内含子也可以不被切除而保留，即一个外显子或内含子是否出现在成熟的mRNA中是可以选择的，这种剪接方式称为选择性剪接。 三、论述题 1、写出乳糖操纵子的结构并试述乳糖单独存在和葡萄糖、乳糖共存两种情况下乳糖操作子基因表达的调节过程。 结构：含Z、Y、A 乳糖操纵子正性、负性、协调调控原理： 1）阻遏蛋白的负性调节：在没有乳糖的条件下，阻遏蛋白能与操纵序列O结合抑制RNA聚合酶和启动序列P的结合，从而抑制酶和启动子的结合，使乳糖操纵子处于阻遏状态。 2）CAP的正性调节：分解代谢基因激活蛋白（CAP）分子内存在DNA和cAMP结合位点。在没有葡萄糖时，cAMP浓度较高，cAMP与CAP结合，cAMP-CAP复合体结合于CAP结合位点，提高了乳糖操纵子的转录活性。 3）不同生长条件下的协调调节：是指乳糖操纵子阻遏蛋白的负性调节与CAP的正性调节机制协调合作。当阻遏蛋白封闭转录时，CAP不发挥作用。如没有CAP加强转录，即使阻遏蛋白从O上解聚仍无转录活性。正是这种协调作用使得，有葡萄糖时，先利用葡萄糖；用完后，再利用乳糖作为能源。 2、酵母双杂交技术的用途 酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。 1）发现新的蛋白质和蛋白质的新功能 2）在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用 3）筛选药物作用位点及药物对蛋白相互作用影响 4）建立基因组蛋白连锁图 3、基因工程中常用的载体有哪些种类？比较克隆载