第5章_表达载体知识.pptVIP

西南大学生物技术专业 基因工程 * 第五章 表达载体 第一节 大肠杆菌表达载体 第二节 穿梭载体 第三节 整合载体 本课件是在网络资源基础上改进而成，在此对有关人士特致感谢！ 西南大学生物技术专业 基因工程 * 一、大肠杆菌表达载体的结构 原核表达载体：适用于在原核细胞中表达外源基因的载体。 均是质粒载体，首先必然满足克隆载体的基本要求，然后增加表达元件。 1、表达元件(expression elements)： 1）启动子(promoter)：三类，即 lac启动子、trp启动子和它们的杂合启动子tac或trc，都受IPTG诱导。 T7噬菌体启动子 λ噬菌体的PL启动子。 第一节 大肠杆菌表达载体 西南大学生物技术专业 基因工程 * 2）终止子：依赖于ρ因子或不依赖于ρ因子（遇茎环结构而终止）。 3）核糖体结合位点(ribosome binding side, RBS)：Shine-Dalgarno (SD)序列，ATG与RBS之间的距离很重要，一般3-11bp。 2、表达形式 完整单一蛋白：单一基因的编码区表达。 融合蛋白(fusion protein)：多个基因的编码区的串联体，但构成一个整体的单一ORF，如果融合标签蛋白有利于蛋白的定向、纯化，如果融合多个目标蛋白，则类似于直接表达了一个多酶复合体一样，可减少载体构建难度，而且可以偶连两个或多个相关基因的