4、动物胚胎移植技术及体外受精.pptVIP

第四章动物胚胎工程技术及体外受精 第一节 胚胎工程技术 胚胎移植 胚胎融合 胚胎分割 胚胎的冷冻保存 早期胚胎培养 胚细胞核移植 一、胚胎移植 受精卵移植 把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫中冲洗出来，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使之继续发育成新个体的技术。 供体 提供胚胎的动物 受体 接受和孕育胚胎的动物 初始阶段 1890-1900 W.Heape将安哥拉兔和荷兰兔的受精卵分别移植到比利时兔的输卵管内，分别获得仔兔2只 1900-1950 主要由英美科学家在家兔、绵羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左右 发展阶段 1950-1970 日本首次在牛胚胎移植上成功，之后日、美采用非手术法移植成功，胚胎移植成功率达70-80% 实用化初始阶段 1970-1980 加美开始成立牛胚胎移植公司，1973年牛冻胚移植成功（英） 实用化研究阶段 1982- 大规模胚胎移植、核移植、嵌合体、胚胎分割、性别鉴定、体外受精在英美日德广泛开展，克隆羊诞生 1.胚胎移植的生理学基础 成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达数十个 每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育 早期胚胎处于游离状态 胚胎发育不存在免疫问题 胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组织联系 胚胎的遗传性不受受体的影响 2. 胚胎移植的基本原则 胚胎移植前后所处的环境的同一性 供体和受体在分类学上的相同属性 动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上的同期性 动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性 胚胎的发育期限：必须处于周期黄体期内 胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不受不良因素的影响 3、胚胎移植 供受体的选择与管理 供体的超数排卵处理和配种 受体的同期发情处理 胚胎回收 胚胎检查 胚胎移植 1）供受体的选择与管理 供体的选择 遗传价值：生产性能优秀的母畜 健康状况:身体健康，营养水平中等以上的未孕动物 繁殖性能：达到配种年龄以上繁殖机能正常的母畜 受体的选择 身体健康，身体状况中上的适繁未孕个体，无生殖道疾病和难产病史 繁殖状况正常，有正常的发情周期 母性良好：泌乳性能、护仔性能 供、受的管理 防疫、记录 饲养管理等 2）、超数排卵 超排：以各种外源性促性腺激素诱发动物卵巢的许多卵泡发育并排出具有受精能力的卵子。 孕母马促性腺激素、促卵泡素、前列腺素、促排卵类药物、孕激素 超数排卵处理的时期应选择在发情周期的后期，即黄体消退时期。 个体对超排处理的反应效果难以预测； 产生不良的后果：胚胎死亡 卵母细胞蛋白质合成过程发生改变 生殖道机能产生影响 3）同期发情（synchronization of eatrus） 采用激素或类激素的药物处理，使这一群母畜在特定时间内集中发情和排卵。 即将母畜的黄体期延长或缩短，使母畜摆脱内、外孕激素对卵巢的控制，在同一时间内引起全部母畜的卵泡发育，从而达到同期发情的目的。 延长黄体期：孕激素 控制卵泡的生长发育和发情表现 缩短黄体期：前列腺素 加速黄体退化，使卵巢提前摆脱体内孕激素的控制 促进卵泡发育、排卵：促性腺激素 羊同期发情——放栓 供体超排处理 供体配种 4）胚胎回收 利用冲胚液从供体的生殖道中冲洗出来，提供移植或其它胚胎工程用。 手术法 非手术法 5）胚胎检查 胚胎质量评价： 透明带的形态和完整性 胚胎的发育与胚龄是否一致 胚胎的形态与匀称性，胚内细胞大小的变化 细胞质的结构及颜色，胚内是否出现空泡，细胞碎片，有无游离细胞 如A级： 为优良胚胎，形态典型，卵裂球轮廓清晰，紧密充实，大小均一，细胞质致密，色调和分布均一。 6天收集的胚胎（未拣） 二细胞至四细胞胚胎 6）胚胎的保存 胚胎的降温：使胚胎停止发育，延长其体外生存时间 体外培养：将胚胎置于体温条件下，在培养液中，使其继续发育 胚胎冷冻：通过一定的处理程序，将胚胎降温冷冻后，保存于液氮中 胚胎冷冻的原理 胚胎冷冻实际是脱水的过程，冷冻保存的关键是设法减少细胞内冰晶对胚胎的损伤。 冷冻过程中，水分形成冰晶造成细胞机械损伤，同时，导致未结冰的细胞内溶液渗透压急剧升高，造成蛋白质变性，导致死胎。 受精卵移植 一般供体为良种或优良个体，而受体为生产性能较差的个体或品种。 “借劣质动物之腹怀优秀个体之胎” 6)胚胎移植的应用范围 在家畜改良方面的应用 在特定品种扩繁上的应用 在动物生物多样性上的应用 其它方面应用：转基因动物、性别控制、体外受精 在家畜改良方面的应用 人工授精技术可成几十到几百倍地提高了优秀种公畜的配种效能。但对优秀母畜来说，受其产仔数和世代间隔的限制，尤