DNA重组技术的基本工具hao)2015.ppt

专题1.基因工程的基本内容 基因工程的概念： 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术或基因拼接技术。 别名： 操作环境： 原理： 操作水平： 结果： 专题1.基因工程的基本内容 一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀” 1、简称： 2、分布： ?? 限制酶的识别特点 以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列 如：GAA TTC CCC GGG CTT AAG GGG CCC 一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀” ?? 3、特点: 黏性末端和平末端 一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀” ?? ④作用： ⑤结果： 　 一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀” 注意： 同种限制性内切酶切割不同的DNA分子肯定产生相同的末端。 不同的限制性内切酶切割不同的DNA分子也能产生相同的末端。 　 3、基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 练习 在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 作为载体的必要条件 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 4) DNA体外重组的实现 例.限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段:你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？ …CTGCA?? …G??? ① …AC …TG ② ??????? CG… GC… ③ …G ? …CTTAA? ④ G…? ACGTC…?? ⑤ …GC …CG ⑥ GT…??? CA…? ⑦ AATTC… G… ⑧ ②和⑦能连接形成 …AC …TG GT…??? CA…? ④和⑧能连接形成 …G ? …CTTAA? AATTC… G… ??????? CG… GC… …GC …CG ③和⑥能连接形成 ①和⑤能连接形成 …CTGCA?? …G??? G…? ACGTC…?? 反向对称 分类： 一种是从大肠杆菌中分离得到的，称为 。 只能缝合 。 另一种是从T4噬菌体中分离得到的，称为 。 既可以缝合 ，又可以缝合 。 作用： 恢复被 切开的两个 之间的磷酸二酯键。 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 平末端 限制酶 核苷酸 黏性末端 黏性末端 载体必须具备的条件： ①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； ②具有一至多个限制酶切点，以便与 外源基因连接 ③具有某些标记基因，便于进行筛选。 ④对受体细胞无害 三、基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 1、 2、常用的载体： 质粒， λ噬菌体的衍生物， 动植物病毒等 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因 3、质粒 本质：小型环状DNA分子。 分布：许多细菌、 酵母菌等生物 3、天然的DN