N型乙酰胆碱受体α10亚基在大鼠内耳耳蜗、前庭中表达.pdf

N型乙酰胆碱受体α10 亚基在大鼠内耳耳蜗、前庭中 的表达1 1 1 1 姚琦 ，孔维佳 ，程华茂 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科（430022 ） Email : meniere@163.com 摘 要： 目的：研究 N型乙酰胆碱受体α10亚基在大鼠前庭终器、Scarpa’s 神经节、基 底膜、螺旋神经节中的表达。方法：运用 RT-PCR技术分别检测大鼠前庭终器、Scarpa’s 神 经节、基底膜、螺旋神经节编码 N型乙酰胆碱受体α10亚基的基因表达。以大鼠脑组织 RNA 为阳性对照。结果：在前庭终器和基底膜上扩增出标志 N 型乙酰胆碱受体α10 亚基基因表 达的 PCR 产物。结论：N 型乙酰胆碱受体α10 亚基在大鼠前庭终器、基底膜上有表达，在 Scarpa’s 神经节、螺旋神经节中无表达。为乙酰胆碱是内耳重要的神经递质之一提供了支 持，并为更完整的理解 N型乙酰胆碱受体在内耳中的传入－传出调节中的作用提供了依据。 关键词：α10 nAChR；耳蜗；前庭；逆转录－聚合酶链反应技术；大鼠 1. 引 言 乙酰胆碱（Acetylcholine, ACh）是哺乳动物中枢神经系统中最丰富和功能最重要的抑 制性神经递质之一。N型乙酰胆碱受体（Nicotinic Acetylcholine Receptor, nAChR）属于 配体门控离子通道超家族成员之一，他们支持着神经系统的化学突触传递。这些nAChRs由我 们已知的十一种亚基：α2-9 和β2-4 nAChR[1,2]组合而成，大多数为两个α亚基和三个β亚 基组成一个nAChR。但α7和α9 亚基可独自形成有功能的同源性受体 （homomeric receptor） [3-6,7] 。由α7和α9 亚基分别组成的同源性受体较其他异源性受体（heteromeric receptor） 具有高钙通过性的特点[8,9] 。人们曾对α9 亚基形成的同源性受体特别感兴趣，它可介导耳蜗 外毛细胞（outer hair cell, OHC）的胆碱能传出调节作用（modulation of cholinergic efferent）[10],这一功能是通过激活AChR引起短暂钙内流而激活钙依赖性钾通道，引起超极 化来实现的[11]。在蟾蜍卵母细胞中，α9 亚基可形成同源性受体，此受体可被ACh激活，其 特性与报道的大鼠耳蜗α9 受体相似[7]但在大鼠OHC中记录到的ACh诱发电流较其他同源性受 [12,13,8] [14] 体如：α7 、α8 要小。这些数据提示虽然α9 亚基可形成同源性受体，但更可能是 需要其他亚基才能功能完备。但将α9 分别与其他已知α亚基（α2-7）一起表达，并未得 [7] [15] 到有功能的受体 。由此推测α9 亚基可能与新发现的一个nAChR亚基α10 共同表达，形 成一个功能完备的受体。 本实验目的在于建立证明α10nAChR亚基是否在内耳前庭、耳蜗中表达的方法，为进一 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20020487062 ）资助。 - 1 - 步阐明 nAChR 介导的毛细胞胆碱能传出调节作用提供分子生物学基础。 2. 材料与方法 2.1 材料制备 动物和组织准备：在本研究中，每次使用 4 只大鼠，重复 3 次，共使用 12 只大鼠。大 鼠断头后迅速取出颞骨，在解剖显微镜下分别分离出前庭终器（椭圆囊、球囊、壶腹嵴）、 Scarpa’s 神经节、耳蜗基底膜、螺旋神经节，直视下取出一只大鼠部分脑干组织作为阳性 对照。 提取总 RNA：使用 Trizol Reagent (Invitrogen, USA.) RNA 提取