牛腹泻病毒的PCR检测方法.pdf

2017年第4期 兽医实验室 牛腹泻病毒的PCR检测方法 林春丽 张海波 陈红霞 侯春燕 云雨生/内蒙古维克生生物科技有限公司 本研究是通过PCR技术对新生牛是否带有牛病毒 Marker购自TakaRa公司；核酸染料购自百泰克有限公 性腹泻病毒进行检验，排除其患病牛，制备无病毒血清， 司；高速低温离心机购自Sigma公司；PCR扩增仪为美 进一步用于兽药的研制。 国伯乐公司，型号为S1000；凝胶成像仪。 2.样品。共30个样本包括：28个未知样本均为新 一、材料与方法 生牛初血清；空白对照；阴性对照和阳性对照。 （一）材料 （二）方法 1.主要试剂。RNAiso plus购自Takara公司；氯 1.PCR检测。PCR技术，即聚合酶链式反应 仿、无水乙醇、75%酒精，DEPC水、ddHO、DNA （polymerase chain reaction，PCR）是由Saiki发明， 2 要比尿囊液免疫组高，抗体水平上升也较快。 （三）分离病毒LN的致病性测定 分离病毒LN株接种10只10日龄SPF鸡胚后， 表2  不同试验组在免疫后不同时间的抗体水平 24 h内无鸡胚死亡。在36～96 h孵育期间致死4枚鸡胚， 不同实验组 HI抗体平均水平 死亡率40%。 项目 原液组 相同HA 组 相同EID50组 相同TCID50组 NC NE HC HE EC EE TC TE 表1  分离病毒LN株致病性测定 7d 4.0 2.6 3.8 2.2 2.5 2.3 3.6 2.5 项目 EID /0.1ml TCID /0.1ml IVPI HA 50 50 14d 6.5 5.2 6.5 5.2 6.4 5.9 6.4 4.6 细胞毒 106.9 106.5 0.8 210 21d 7.3 6.7 7.2 6.4 7.1 6.5 7.1 6.1 胚毒 106.3 106.1 0.9 29 （四）禽流感H9N2亚型LN株免疫保护试验 三、结论 在本试验中，我们将分离病毒LN株油乳剂灭活疫 成功从辽宁省发病鸡中分离到了一株H9亚型禽流 苗免疫SPF鸡，并排除了免疫时抗原量对各组免疫保护 感病毒，并通过SPF鸡致病性、EID 和IVPI等的测定