原子力显微镜的原理和应用.docVIP

原子力显微镜 原子力显微镜Atomic Force Microscope, AFM）起源于扫描隧道显微镜技术，属于扫描探针显微镜（Scanning Probe Microscope, SPM）家族中的一种。它广泛应用于生物、物质结构、分子生物学等领域，在蛋白单分子结构与功能研究中得到广泛地应用[]1.1 AFM的原理 AFM通过探测探针与被测样品之间微弱的相互作用力(原子力)来获得物质表面形貌的信息，分辨率可达原子级水平。 AFM采用显微制作的探针扫描待测样品表面，探针被固定在一根有弹性的悬臂的末端，悬臂通常由金和硅的材料制成。探针在样品表面扫描时，测量探针与样品之间的相互作用力，随着针尖与样品表面之间距离的不同，相应产生微小的作用力，就会引起悬臂的偏转。反馈电路通过控制扫描头在垂直方向上的移动，使扫描过程中每一点( x, y)上探针和样品之间的作用力保持恒定;当激光束照射在悬臂的末端，经反射进入光电检测器。针尖与样品表面的距离不同使得激光束的方向发生改变，这就使光电检测器接收到的信号变化，送入计算机的电脉冲也产生相应的变化，检测器将反射的激光束转化成电脉冲，电脉冲信号经过计算机处理，然后计算机将这些信息转换成或明或暗的区域，这样扫描头在每一点( x, y)上的垂直位置被记录，作为样品表面形貌成像的原始数据，从而产生了有明暗对比度的样品的表面形貌图像，可得到样品表面的三维形貌图像[]。 AFM的观测模式有三种:接触(contact mode)、非接触式(non contact mode)和轻敲(tapping mode)。在接触模式中，，，，，300000次，，[]。 1.2 AFM的特，AFM[][]。 ①高分辨率。AFM没有透镜，， ②简化样品的处理过程。AFM是非破坏的分析方法，AFM，AFM的载体上，，，AFM，，，AFM(空气中或液体中)或生理条件下直接成像，，，， AFM， AFM，， ③可同时得到样品的二维和三维成像。AFM技术可真实地得到样品表面的形貌结构图像， 采用轻敲模式AFM观察到加热后β-乳球蛋白，，25nm，1或2个蛋白单体[54]。这证明在低pH低离子强度下，[]。 Iwasaki等[54]采用AFM分析加热对于肌浆球蛋白丝形态的影响，70 ℃时原来的串珠结构变成绳子结构，Yang等[]使用AFM观察鲶鱼凝胶结构，118 nm的环形孔洞，球形凝聚体的平均直径为267 nm。他们认为球状凝聚体和环形孔洞的形成与水和离子渗透过正在水解胶原质时的方式有关。 AFM能从分子水平上解释食品流变学特性的差异，Iwasaki等[]报道了采用AFM分析由热导致和压力导致的细丝状肌浆球蛋白凝胶中的串珠结构和弹性之间的关系。近期出现的阶段成像，，AFM能够定量测定物质弹性。 然而，AFM也有以下缺点：AFM的工作区域选择非常盲目，相对较小的扫描面积，， []朱杰，孙润广. 原子力显微镜在蛋白单分子结构与功能研究中的应用[J]. 分析化学, 2006, 34(5): 735-740. []陈耀文,林月娟,张海丹,等. 扫描电子显微镜与原子力显微镜技术之比较[J]. 中国体视学与图像分析, 2006, 11(1): 53-58. []芦鑫，程永强，李里特. 研究蛋白质凝聚凝胶的技术进展[J]. 中国粮油学报, 2010, 25(1): 132-137. []Yang H S, Lai S J , L i Y F, et al. App lication of Atomic Force Microscopy as a nano-technology Tool in Food Science[ J ]. Journal of food science, 2007, 72 ( 4) : 65 -75. []Shewry P R, Miles M J, Humphris A D L, et al. Scanning Probe Microscopy Studies of Cereal Seed Storage Protein Structures[ J ]. Scanning, 1999, 21: 293 - 298 []Ikeda S, Morris V J. Fine - stranded and particulated aggregates of heat - denatured whey proteins visualized by atomic force microscopy[ J ]. Biomacromolecules, 2002, 3:382 – 389. []Yang H, Wang Y, Regenstein J M, et al. Nanostructural characterization of ca