人参二醇皂苷对重症胰腺炎急性肺损伤时水通道蛋白表达的影响.docVIP

人参二醇皂苷对重症胰腺炎急性肺损伤时水通道蛋白表达的影响 　　作者：赵航 陈光 王贵民 孙东辉 张永喜 赵雪俭 谭毓铨 作者单位：(吉林大学第一医院普外科，吉林 长春 130021) 　　【摘要】 目的 探讨人参二醇皂苷(panaxadiols，PDS)对急性重症胰腺炎(SAP)急性肺损伤时的水通道蛋白(AQP1)影响。方法 Wistar大鼠随机分为假手术组(SO组)、SAP组、地塞米松组(DEX组)和PDS组，每组8只。SAP组、DEX组和PDS组大鼠胰管逆行注射5%牛磺酸黄制备大鼠胰腺炎模型;SO组手术操作同其他组，但不向胰管内注射5%牛磺酸钠。制模成功后DEX组腹腔注入DEX，剂量为0.5 mg/100 g;PDS组腹腔注入PDS，剂量为2.5 mg/100 g。模型制作6 h后杀鼠，测定血清淀粉酶、肿瘤坏死因子Α(TNFΑ)、白细胞介素6(IL6)，肺脏湿/干重比值;应用RTPCR测定肺脏AQP1 mRNA的水平，应用蛋白印记杂交方法观察AQP1蛋白改变情况。结果 应用PDS治疗后AQP1在mRNA和蛋白水平均有所增加，减轻了肺水肿、肺损伤。结论 在SAP时应用PDS可以抑制TNFΑ、IL6表达，减轻血液浓缩，改善微循环，增加肺组织水通道蛋白1的表达，从而减轻肺水肿、肺损伤。 　　【关键词】 水通道蛋白;急性重症胰腺炎;急性肺损伤 　　急性重症胰腺炎常合并肺水肿、肺损伤，肺脏水通道蛋白(aquaporin1，AQP1)表达减少，在 mRNA水平和蛋白表达水平均有明显下降，说明AQP1表达的减少在急性胰腺炎肺水肿发生中起了重要作用〔1〕，地塞米松通过抑制炎症反应介质、提高水通道蛋白表达等改善SAP肺损伤〔2〕。PDS对应激状态下的细胞膜及细胞器有较强的保护作用，促进细胞DNA的合成和损伤后的修复，促进细胞有丝分裂加快增殖和生长速度，抑制细胞凋亡。人参皂苷具有抗休克、保护细胞膜、增加清除氧自由基的功能，在休克、缺血等方面的实验中发现其具有和糖皮质激素相同的作用，达到保护细胞，细胞器的功能，促进LPS休克大鼠肺组织AQP1表达。本实验旨在探讨在胰腺炎治疗中应用PDS的效果。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 Wistar 大鼠，体重200～250 g，雄雌不限，购自吉林大学实验动物中心;牛磺胆酸钠购自Sigma公司。RNAoutTM购自华氏生物公司;TNFΑ、IL6放免检测试剂盒购自解放军总医院科技开发中心放免所。抗大鼠AQP1抗体由美国加州大学旧金山医学院杨宝学教授惠赠，PDS由吉林大学基础医学院天然药物研究室提供。 　　1.2 模型制备 大鼠适应性饲养1 w。术前12 h禁食、不禁水。随机分为SAP组、假手术(SO)组、地塞米松(DEX)组和PDS组，每组8只。SAP组乙醚浅麻醉后，上腹部正中切口长约1 cm入腹;找到十二指肠侧壁胰胆管汇合膨大处，用四号针头(平面朝上)穿刺，成功后向胆总管内进入约5～6 mm，用无创小血管夹于肝门侧暂时阻闭肝门侧胆管;向胆胰管内逆行匀速注入5%牛磺胆酸钠(剂量为0.1 ml·100 g-1·min-1);10 min后去除动脉夹，关腹。SO组手术操作方法同SAP组，但不向胰管内注入牛磺胆酸钠。DEX组在制模成功后，腹腔内注入DEX，剂量为0.5 mg/100 g。PDS组在制模成功后，腹腔内注入PDS，剂量为2.5 mg/100 g。各组动物于手术结束后皮下注射0.9%氯化钠2 ml，以补充丢失的水分。于造模6 h后杀鼠。经下腔静脉采取5 ml血，离心(3 000 r/min，3 min)，取上清，-20℃冻存。取左肺测定肺湿重/干重比，右肺取出一部分立即10%甲醛固定，行组织学观察。其余部分立即冻存于液氮中，-80℃冰箱中保存。 　　1.3 血清淀粉酶、白蛋白、红细胞压积、TNFΑ、IL6测定 应用自动生化分析仪测定血清中淀粉酶(AMS)和血清白蛋白，红细胞压积采用流式细胞仪检测，应用TNFΑ、IL6放免检测试剂盒采用放免法检测血清TNFΑ、IL6水平。 　　1.4 肺湿/干重比值测定、组织学观察 杀鼠后取左叶肺组织测定湿重，90℃烘烤48 h后，测定干重，测定湿/干重比值。固定后的肺组织常规切片、HE染色后镜下观察。 　　1.5 肺组织AQP1mRNA表达 采用RNAoutTM按照操作说明提取肺组织总RNA，并检测纯度及完整性。在100 Μl 逆转反应体系中加入5 Μg大鼠肺组织 RNA，逆转录合成及纯化cDNA。行RTPCR：AQP1引物序列：5′ATGGCCAG CGAGTTAAAGAAGA3′，反向引物：5′TTTGGGCTT CATCTCCACCC