考马斯亮兰法测定西宁市售主要四种袋装牛奶的蛋白质含量.doc

2 0 0 8 年 第 4 期 青海师范大学学报( 自然科学版) J o u r n a l o f Q i n g h a i N o r m a l U n i v e r s i t y ( N a t u r a l S c i e n c e ) 2 0 0 8 N o 4 考马斯亮兰法测定西宁市售主要四种袋装牛奶的蛋白质含量 杨家华, 谢占玲, 愈芳, 赵国珍 ( 青海大学 生科系, 青海 西宁 8 1 0 0 1 6 ) 摘 要: 采用考马斯亮兰法 测定 了西 宁市 售 主要 四种 袋装 牛奶 中的 蛋白 质 含量. 四种 样品 的蛋 白质 含 量分 别为: 2 2 g / 1 0 0 m L、2 2 g / 1 0 0 m L、2 0 g /1 0 0 m L 和 1 9g / 1 0 0 m L. 本地牛奶的蛋白质含量明显高于其他省份的牛奶. 利用考马斯亮兰 法测 出牛奶中蛋白质的含量明显低于商标中 2 9g / 1 0 0 m L 的标示值. 关键词: 牛奶; 蛋白质; 考马斯亮兰法 中图分类号: T Q 937 文献标识码: A 文章编号: 1 0 0 1 - 754 2 ( 2 0 0 8 ) 0 4 - 0 0 6 8 - 0 3 牛奶中蛋白质含量的高低将直接决定牛奶的 1 . 2 器材 营养价值和质量, 因为蛋白质是人类最重要的营 可见光分光光度计; 旋涡混合器; 试管. 养物质之一, 是生命活动的基础物质, 是构成人体 1 . 3 操作方法 新生组织、维持人体健康的重要成分, 它还具有许 1 . 3. 1 取数支试管, 1 支作空白, 1 2 支留作未知 多生物学功能. 本文以市售的袋装牛奶为检测对 样品, 其余试管分为两组按表中顺序, 分别加入样 象, 采用考马斯亮兰法对其营养成分 蛋白质 品、水和试剂, 即用 1 0 m g / m L 的标准蛋白质溶 的含量进行测定, 为消费者提供参考依据. 液给各试管分别加入: 0 、0 0 1 、0 0 2 、0 0 4 、0 0 6 、 1 976 年由Br a df o r d 建立的考马斯亮兰法( Br a d- 0 0 8 、0 1 m L, 然后用无离子水补充到 0 1 m L. 最 f o r d 法) , 是根据蛋白质与染料相结合的原理设计 后各试管中分别加入 5 0 m L 考马斯亮兰 G 2 50 的. 这种蛋白质测定法具有简单、快速、灵敏度高、重 试剂, 每加完一管, 立即在旋涡混合器上混合( 注 现性好等特点, 因而正在得到广泛的应用. 意不要太剧烈, 以免产生大量气泡而难于消除) . 考马斯亮兰 G - 2 50 染料, 在酸性溶液中与 未知样品的加样量见下表中的第 8 、9、1 0 管. 蛋白 质 结 合, 使 染 料 的 最 大 吸 收峰 的 位 置 1 . 3. 2 加完试剂 2 ~ 5m i n 后, 用比色皿, 在分光 ( m a x) , 由 4 6 5n m 变为 595n m , 溶液的颜色也由 光度计上测定各样品在 595n m 处的光吸收值 棕黑色变为兰色. 经研究认为, 染料主要是与蛋白 A595, 空白对照为第 1 号试管, 即 0 1 m LH2 O 加 质中的碱性氨基酸( 特别是精氨酸) 和芳香族氨基 5 0 m LG 2 50 试剂. 酸残基相结合. 2 结果与分析 1材料和方法 2 . 1 标准曲线 1 . 1试剂 1 . 1 . 1标 准蛋白质 溶液, 用牛血清 清蛋白 ( BS A) , 配制成 1 0 m g / m L 和 0 1 m g / m L 的标准 蛋白质溶液. 1 . 1 . 2考马斯亮兰 G 2 50 染料试剂: 称 1 0 0 m g 考马斯亮兰 G 2 50 , 溶于 50 m L95% 的乙醇后, 表 1 BS A 为标准蛋白测出的标准曲线 再加入 1 2 0 m L8 5%的磷酸, 用水稀释至 1 L. 收稿日期: 2 0 0 8 - 0 3- 0 5 作者简介: 杨家华( 1 96 5- ) , 女( 土家族) , 湖南永顺人, 副教授.  第 4 期 杨家华, 谢占玲, 愈 芳, 等: 考马斯亮兰法测定西宁市售主要四种袋装牛奶的蛋白质含量 6 9 2 . 2 4 种牛奶在 595n m 处的光吸收值 3讨论 1目前根据蛋白质的性质, 测定方法有两大 类: 一类是利用蛋白质的共性, 如含氮量、肽键和 折射率等测定蛋白质的含量, 通常采用