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第六章 体外放射分析技术In vitro radioassay 二、分类: 放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA Ag*与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争性与Ab结合，当Ag*和Ab的量保持恒定，Ag*与Ag之和大于Ab时，则Ag*-Ab复合物的形成受Ag含量的制约，二者之间存在竟争抑制的函数关系，即随着Ag浓度的增加，Ag*-Ab复合物就减少，因为Ag*对Ab的结合被Ag竞争性抑制。根据这一函数关系的标准曲线，可求出被测抗原的含量 二、RIA的基本步骤： 实验由两部分组成： 1.标准曲线：用一系列浓度递增的标准品（oAg），在 严格相同的条件下同*Ag竞争与Ab结合反应，以oAg的 剂量为横坐标， *Ag.Ab结合率（B%）为纵坐标制得 刻度曲线（Calibration curve）； 2.样本测定：同等条件下，待测样本可获得一定的B%， 由此可从标准曲线上求得待测物（oAg）的含量。 三、质量控制(Quality Control): 目的：为了获得准确可靠的测定结果 室间：某一地区/全国性机构就一些分析项目 质控 对各实验室所得结果进行统计比较 室内：实验室内部对每次分析结果的质量进 行检查和控制 主要优点： ? 生物制剂，稳定性受多种因素影响，需有质量控 制措施（Quality Control) 非竞争性放射免疫分析(免疫放射分析 IRMA) IRMA与RIA的主要区别： IRMA主要优点： 温育时间短： 37℃温育2?3小时即可 电化学发光（ECL）：  ECL是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫之后的新一代标记免疫测定技术 ECL是一种在电极表面由电化学引发的化学反应，实际上包括了电、化学发光两个过程，故是化学发光的一种发展，电化学反应在电极表面周而复始的进行，光信号明显增强，因而ECL与CL的差异在于： ECL是电启动发光反应，CL是通过化合物简单的混合启动的发光反应。 ECL反应更易精确控制，更具灵活性。 ECL反应原理： 化学发光反应导致光的发射是来自钌（Ru）化合物的电的 激发，而不是化学的激发。 * * 山西医科大学第二临床医学院 体外分析发展史 Yalow Berson 一、定义 以放射性核素或其他非放射性物质标记的配体(Ligand)为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。 体 外 分 析 技 术 体外放射分析 体外非放射分析 放射性竞争 结合分析 放射性非竞 争结合分析 放射免疫分析 (radioimmunoassay, RIA) 免疫放射分析 (immunoradiometric assay, IRMA) 酶免疫分析(EIA) 化学发光免疫分析 (CLIA) 荧光免疫分析(FIA) 一、RIA的基本原理 （一）竞争抑制结合反应： 放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。 分析原理 *Ag + Ab Ag + *Ag-Ab + *Ag Ag-Ab + Ag 条件： *Ag与Ag免疫活性相同 *Ag与Ab恒量 *Ag与Ag总量大于Ab有效结合位点 （二）剂量反应曲线：标准曲线 标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。 标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。 标准曲线的绘制方法 用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应； 在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F； 分别测量B和F的放射性； 用反应变量（如B/F）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。 标 准 曲 线 误差： A. 随机误差(Random Error)： 放射性测量的统计误差 不可避免，呈高斯分 实验操作的实验误差 布，以精密度评价 试剂配制等