RegⅣ基因在结直肠癌细胞系中的mRNA表达及pcDNA_0.docVIP

RegⅣ基因在结直肠癌细胞系中的mRNA表达及pcDNA 作者：高峰，郑声琴，张宇伟，金月玲，田小强，黄培林 ［摘要］ 　　目的：探讨Reg基因在4种结直肠癌细胞系中的表达水平，构建并转染pcDNAReg重组质粒，为阐明Reg基因在结直肠癌发生 发展 中的作用机制奠定基础。 方法 ：采用RTPCR方法检测HT29、Caco2、Sw480、LoVo细胞系的Reg基因表达水平，将获得目的基因Reg克隆于pcDNA3.1/（-）质粒上，用PCR、酶切进行鉴定后，脂质体转染至低表达甚至不表达Reg的结直癌细胞系，用G418筛选后进行RTPCR鉴定。结果：HT29、Caco2细胞系Reg基因高表达，Sw480细胞系表达较前两者弱，LoVo细胞系Reg阴性表达；构建的重组质粒中含有Reg基因，经pcDNAReg转染的LoVo细胞Reg基因呈阳性表达。结论：Reg基因在不同的结直肠癌细胞系中表达水平不同。成功构建和转染了pcDNAReg,可使得Reg（-）的LoVo细胞系Reg基因呈阳性表达。 　　［关键词］ Reg基因；结直肠癌；重组质粒；基因表达；基因转染 　　Abstract：Objective To investigate the expression of Reg in four colorectal cancer cells and construct recombinant plasmid pcDNARegⅣ and transfect it for further study of RegⅣ in colorectal cancer cells.Methods RegⅣ obtained from colorectal cancer cells by RTPCR was cloned into pcDNA3.1/(-) to form pcDNARegⅣ which was transfected into colorectal cancer cell with less or no expression of RegⅣ via liposome after identification of PCR，restriction enzyme digesting and DNA sequencing. The colorectal cancer cells selected by G418 were identified by RTPCR.Results There was a high expression of Reg in HT29 and Caco2, less in Sw480，no expression in LoVo. The recombinant plasmid had Reg gene which was expressed in RegⅣregative LoVo after transfection.Conclusions The different expression levels of RegⅣ in four colorectal cancer cells are confirmed and the pcDNARegⅣ has been constructed and transfected successfully, which makes RegⅣ highly expressed in RegⅣregenerating LoVo cell. 　　Key words：regenerating gene ; colorectal cancer; recombinant plasmid; gene expression; gene transfection 　　Reg是Reg家族中一个在结直肠腺瘤高表达的差异表达基因，它的高表达与腺瘤的形成、腺癌的发生有关［13］，并用反向Northern Blot得到证实［4］。尤其在癌前病变（腺瘤、溃疡性结肠炎［5］）、结直肠腺瘤癌变区的高表达提示，它可能是一个消化系统癌微转移的有效生物标记物。 　　 目前 Reg基因在结直肠癌中的表达改变已逐渐被人们所关注，但Reg在癌中的上调是一种癌发生的伴随现象还是一种肿瘤特异性的反应，或者只是组织损伤的敏感反应物还是在癌中起癌基因的作用等 问题 尚未阐明。本实验通过检测Reg基因在4种结直肠癌细胞系中的mRNA表达水平，然后将高表达Reg的cDNA目的基因构建成重组质粒pcDNAReg，转染［67］至低表达甚至不表达Reg的结直肠癌细胞系中，为阐明Reg在癌发生中的作用机制提供一个有效可靠的方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　E.coli DH5α大肠杆菌为东南大学分子病理