Pgp、MRP、Bcl2、Bax在膀胱癌中的表达及其意义_0.docVIP

Pgp、MRP、Bcl2、Bax在膀胱癌中的表达及其意义 【摘要】 目的:探讨P糖蛋白（Pgp）、多药耐药相关蛋白（MRP）、Bcl2、Bax在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义。 方法 ：采用SP免疫组化技术检测59例膀胱移行细胞癌和13例正常膀胱组织标本中Pgp、MRP、Bcl2、Bax的表达。结果：(1)复发膀胱癌组织中Pgp、MRP、Bcl2表达水平高于初发癌组织(P0.05)； Bax表达水平与之相反(P0.05)。（2）Pgp、Bcl2表达随着病理分级、分期上升而增高，Bax表达随着病理分级、分期上升而下降，MRP与病理分级、分期不相关。（3） Pgp表达与Bcl2呈正相关，与Bax呈负相关。结论：膀胱癌组织Pgp、MRP、Bcl2、Bax可作为判断膀胱癌的恶性度及预后的重要指标。 【关键词】 膀胱肿瘤 多药耐药 P糖蛋白 凋亡 膀胱癌多为移行细胞癌,在手术基础上辅以膀胱灌注已成为膀胱癌的主要 治疗 方案。术后易复发是其重要的生物学特征。P糖蛋白（Pgp）、多药耐药相关蛋白（MRP）作为两种跨膜蛋白都可以介导肿瘤多药耐药（MDR）。本 研究 采用免疫组化方法检测Pgp、MRP、Bcl2、Bax在膀胱癌组织中的表达,并 分析 Pgp与MRP、Bcl2、Bax的关系。 1 材料与方法 1.1 材料 膀胱肿瘤标本59例,来自于本院和江苏省肿瘤 医院 2004年12月 2006年7月行电切或开放手术患者（年龄36 83岁,男49例,女10例），均经病 理学 证实为膀胱移行细胞癌（TCC）,另取正常膀胱组织13例（经膀胱前列腺摘除术中获得）。膀胱肿瘤患者术后常规行羟基喜树碱膀胱内灌注化疗。肿瘤标本均行ＨＥ染色诊断,按ＷＨＯ病理分级标准,G1 32例,G2 17例,G3 10例;按ＵＩＣＣ临床分期,Ｔ1 34例,Ｔ2 15例，T3 4 10例。其中未经化疗的初发肿瘤30例,化疗后复发肿瘤29例。单发性肿瘤42例，多发性肿瘤17例。送检标本用10%中性福尔马林固定24h。 1.2 方法 1.2.1 实验方法链霉卵白素（SP）两步法免疫组化技术检测59例膀胱移行细胞癌和13例正常膀胱组织标本中Pgp、MRP、Bcl2、Bax的表达情况。SP试剂盒为美国ZYMED产品。Pgp、MRP、Bcl2、Bax多克隆抗体由北京中杉公司提供。取材后石蜡包埋,常规5μm切片、烤片2h。脱蜡至水、PBS缓冲液浸泡10min，EDTA 9.0抗原微波修复30min,新鲜配置的3%双氧水、封闭用血清孵育10min，加一抗4孵育过夜,PBS缓冲液冲洗10min,加二抗孵育15min,PBS缓冲液冲洗10min,滴加链霉卵白素孵育15min，镜下控制ＤＡＢ显色液,自来水冲洗10min,苏木精染色液复染，乙醇、二甲苯常规脱水、透明，中性树胶盖玻片封片。Pgp、MRP采用肾癌组织，Bcl2、Bax采用前列腺增生组织作阳性对照（阳性对照片由北京中杉公司提供），PBS代替一抗作为阴性对照。 1.2.2 结果判定 对不同分组的膀胱癌组织中各蛋白表达情况进行比较时，用阳性表达细胞数量的分值和染色强度的分值两项加权法[1]：连续随机察看10个高倍视野，以定位明确的阳性表达细胞1%为0分，1% 5%为0.5分，6% 25%为1分，26% 50%为2分，51% 75%为3分，75%为4分；以阳性细胞染色强度出现淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。将每一标本两项得分相乘得出总分0 4分为阴性，4分为阳性。 1.3 统计学处理 应用 SAS 8.0统计分析软件,采用卡方检验和Spearman秩相关分析。 2 结 果 2.1 Pgp、MRP、Bcl2、Bax的表达 初发膀胱移行细胞癌组织中Pgp、MRP、Bcl2、Bax阳性表达分别为50%(15/30)、47%(14/30)、30%(9/30)、70%(21/30)；化疗后复发膀胱肿瘤组织中Pgp、MRP、Bcl2、Bax阳性表达分别为86%(25/29)、68%(20/29)、62%(18/29)、55%(16/29)；正常对照Pgp、MRP、Bcl2、Bax阳性表达分别为7.7%(1/13)、7.7%(1/13)、7.7%(1/13)、15%(2/13)。正常膀胱组织、初发膀胱肿瘤组织、化疗后复发膀胱肿瘤组织内Pgp、MRP、Bcl2、Bax表达两两比较都有显著性差异（均P＜0.05）。多发性肿瘤中Pgp、Bcl2的表达明显高于单发性肿瘤，Bax表达明显低于单发性肿瘤（表1）。免疫组化染色显示Pgp、MRP抗原呈棕黄色，主要表达在细胞膜；Bcl2、Bax抗原呈棕黄色或深棕黄色，主要表达在细胞质（图1）。 表1 多发性与单发性肿瘤Pgp与Bcl2、Bax 2.2 膀胱癌中Pg